[求救] 請問流式細胞儀的cell cycle上機步驟

看板Biotech (生命科學)作者 (silversky)時間12年前 (2013/07/20 10:27), 編輯推噓4(409)
留言13則, 5人參與, 最新討論串1/1
各位板大好 想請問各位使用流式細胞儀PI染色看cell cycle的機器操作方面 之前老師是有操作給我看過 簡短操作如下(儀器方面): 1. 將FL3(PI)由原先的Log調為Line(線性) 開啟FSC SSC 及 FL3的Histogram 2. 開始上Sample 並調整FSC SSC 並Gate所要看的細胞群 3. 調整FL3的Histogram 調整Sub G1, G1, S, G2/M的位置 4. 調整好之後 開始收取Data 我想問的是: 之前有上過課 聽說PI染劑非常的黏 有時機器會將黏在一起的兩顆細胞 誤判為一顆 (ex. 2n+2n=4n) 所以要做一個步驟排除這種誤判 我在與老師學實驗的時候也有提出這個問題 不過老師卻說不用 但並沒有 說為什麼 想請問各位板大 我們老師這樣的做法是正確的嗎? 還是真的少了哪一個步 驟呢? 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.173.34.99

07/20 10:47, , 1F
用FSC就能把黏一團的細胞排除在外了吧...
07/20 10:47, 1F

07/20 11:08, , 2F
喔喔! 所以這種上法是正確的囉?
07/20 11:08, 2F

07/20 11:21, , 3F
有control組比較應該就沒什問題...畢竟機器操作就那樣
07/20 11:21, 3F

07/20 11:22, , 4F
在意的話就在上之前先輕輕vortex
07/20 11:22, 4F

07/20 11:31, , 5F
http://ppt.cc/Z5jd p15開始, 有教你如何排出黏在一起的細胞
07/20 11:31, 5F

07/20 11:32, , 6F
FSC無法分出來的
07/20 11:32, 6F

07/20 11:41, , 7F
原po可以參考 我是染PI都沒碰過這問題啦...
07/20 11:41, 7F

07/20 12:34, , 8F
5樓正解,請用FL3-W對FL3-A排除doublets
07/20 12:34, 8F

07/20 12:36, , 9F
當然像一樓都沒遇過是最好的,這跟cell type也很有關係
07/20 12:36, 9F

07/21 11:26, , 10F
感謝各位大的解答 所以說明書上p15的方法是要每次上
07/21 11:26, 10F

07/21 11:27, , 11F
都做嗎? 還是覺得Data怪異再做呢?
07/21 11:27, 11F

07/21 16:00, , 12F
我是都做 反正也沒差到多少時間
07/21 16:00, 12F

07/21 17:13, , 13F
好! 謝謝各位大大! 我試試看!
07/21 17:13, 13F
文章代碼(AID): #1HwVMf-Q (Biotech)
文章代碼(AID): #1HwVMf-Q (Biotech)