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[求救] western blot band像海鷗

看板Biotech (生命科學)作者 (琪)時間12年前 (2013/07/27 01:17), 編輯推噓5(5推 0噓 5→)
留言10則, 7人參與, 最新討論串1/1
各位好 最近western壓小分子量的結果都會這樣 想要請問大家有沒有遇過類似的問題 這張是看分子量14&16壓出來的圖 http://ppt.cc/x0ge 我是用15%的膠，蛋白濃度50ug 然後有試過提高&降低蛋白濃度，但是跑出來還是會有海鷗形狀 濃度越高海鷗幅度越大 跑膠的時候通常是用80V，後來重跑用60V也是一樣 transfer條件是25V，over night，流水 也試過將protein lysis、6X dye換新的 還有看17kDa的histone也是這種情形 實驗室其他人也有這種狀況 但是其他%數的(or大分子量)就沒有這種問題 就只有要看小分子量的蛋白 我跑了好多次都是這樣.... 想請問大家知道是哪裡出了問題嗎?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 1.165.186.99
推
07/27 03:03, , 1F
DNA。 下次sample sonicate一下
07/27 03:03, 1F
→
07/27 03:05, , 2F
sample裡的detergen含量太高？
07/27 03:05, 2F
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07/28 16:19, , 3F
我都有超音波震盪10秒x3次，而且之前都不會有這種band
07/28 16:19, 3F
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07/28 16:19, , 4F
上學期都不會這樣的說.....
07/28 16:19, 4F
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07/28 23:37, , 5F
震過還會這樣喔 真神奇
07/28 23:37, 5F
推
07/28 23:41, , 6F
換一台power supply看會不會改善
07/28 23:41, 6F
推
07/29 23:09, , 7F
以前有遇過類似的情形，那時原因是發生在膠體凝結部分
07/29 23:09, 7F
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07/29 23:11, , 8F
最後是將APS改成fresh prepare才解決
07/29 23:11, 8F
推
07/30 22:58, , 9F
推樓上，不過我們實驗室當時也是換掉一些過期的東西就OK
07/30 22:58, 9F
推
07/31 02:01, , 10F
順便檢查Tris-HCL的pH值對不對
07/31 02:01, 10F
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