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[求救] SDS 空Well問題

看板Biotech (生命科學)作者 (SUN)時間12年前 (2013/08/07 19:39), 編輯推噓2(2推 0噓 18→)
留言20則, 5人參與, 最新討論串1/1
最近才剛接觸蛋白質的實驗，剛剛跟室友討論到一個問題 以前做SDS也沒有想過這個問題 假入我有5個Well sample只有3個, 剩下的空well要補東西嗎? 還是load完sample就直接跑呢? (大學實驗課是這樣沒錯囧orz 室友說他們家學姊說要load sample buffer 我們在想是不是怕gel外擴? 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.235
推
08/07 19:43, , 1F
沒錯喔~
08/07 19:43, 1F
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08/08 09:27, , 2F
學姐正解, 有補會漂亮很多(補1X sample buffer)
08/08 09:27, 2F
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08/08 09:28, , 3F
不補的話load太多會越跑越胖 半路發福
08/08 09:28, 3F
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08/08 10:14, , 4F
不適怕gel外括 是有sample的lane會往沒有sample的lane
08/08 10:14, 4F
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08/08 10:14, , 5F
擴散開來 拿來當data就很難看
08/08 10:14, 5F
推
08/08 13:08, , 6F
哈,看太快,樓上說的沒錯(不是gel是lane變胖)
08/08 13:08, 6F
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08/08 13:54, , 7F
外擴的程度跟 Gel 和 running buffer 的性質也有關，
08/08 13:54, 7F
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08/08 13:55, , 8F
我用 commercial gel 跑就算有空的 well 也完全不會外擴
08/08 13:55, 8F
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08/08 13:56, , 9F
，倒是稀釋 sample buffer 要用 ddH2O、PBS 還是 RIPA？
08/08 13:56, 9F
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08/08 13:57, , 10F
我問到三種答案都有....
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08/08 13:57, , 11F
哪一家的precast不會？ Bio-Rad帶自家產品來我們lab實作
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08/08 13:58, , 12F
還不是一樣往外擴，還是專員自己跑得
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08/08 18:59, , 13F
我是用RIPA, 因sample也是溶在RIPA裡 不過影響不大
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08/09 00:07, , 14F
Invitrogen NuPAGE® Bis-Tris Gels, 4-12%，用 MOPS
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08/09 00:09, , 15F
running buffer，就是沒外擴，lane 與 lane 之間還分的
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清清楚楚，只是一片的價格......w
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08/09 00:34, , 17F
你下次可以跑％高一點的,時間也久一點看看,一般PAGE大分子
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08/09 00:36, , 18F
也不會外擴,有此情況的通常LMW分子
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08/09 00:38, , 19F
marker也可以參考,如果兩旁都有sample,marker越下面就越背
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08/09 00:40, , 20F
擠壓,但是大分子的擠壓情況就不明顯
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