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[求救]yT&A vector問題

看板Biotech (生命科學)作者 (j31yo20)時間12年前 (2013/08/12 11:57), 編輯推噓2(2推 0噓 10→)
留言12則, 6人參與, 最新討論串1/1
已經使用yT&A vector做實驗很久了，但是最近發現，接到yT&A vector後去定序， 發現要把forward定序完的那一條做reverse-complement才會跟reverse定序完、 原本的sequence符合(通常不是把reverse 那一條作reverse-complement)，這樣 讓我覺得在把sample做PCR完後，接到yT&A vector上有可能反接吧? 有沒有人 跟我發生一樣的情況，那只好重做clone嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.114.191.88
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08/12 14:26, , 1F
你如果把TA cloning的原理再看仔細一點就會發現
08/12 14:26, 1F
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08/12 14:26, , 2F
反接是很正常的事
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推
08/12 17:24, , 3F
一樓正解，不過如果你當初在primer有設計restriction enzyme
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08/12 17:25, , 4F
cutting sites，反接也就沒差，不影響你sub-cloning
08/12 17:25, 4F
推
08/12 19:18, , 5F
您的TA還要再多做一點~看看原理吧!!
08/12 19:18, 5F
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08/12 20:01, , 6F
這反接的機率有點高 transformation完 長出四顆，都是反接
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08/12 20:02, , 7F
ok 謝謝大家嚕
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讓子彈再飛一會
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08/12 20:31, , 9F
機率不會高，就50%，運氣問題 :) 加油
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08/12 21:12, , 10F
不會真的是 50%，經驗上有些序列就是很容易都是正接，
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08/12 21:12, , 11F
或是挑了幾十顆都是反街的例子也有。
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08/12 21:13, , 12F
話說只有 4 顆也太少了吧？
08/12 21:13, 12F
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