[求救] 細胞RAW264.7培養繼代問題

看板Biotech (生命科學)作者 (榕果)時間12年前 (2013/08/13 01:45), 編輯推噓9(9018)
留言27則, 9人參與, 最新討論串1/1
我想請問養過這株RAW264.7的細胞株嗎? 我目前正在做細胞的繼代 但是Passage2~3次後 隔天去看細胞幾乎都活化了 細胞來源:BCRC 培養基:90% GIBCO DMEM 的 Power with 4mM L-glutamine, 4500mg/L Glucose 另加1.5g Sodium bicarbonate 10% GIBCO 的 FBS 繼代方法: 1.滿盤時,吸除舊的medium,加入1ml新鮮medium至25T來刮細胞 2.吸取 1ml細胞溶液和9ml新鮮medium在15ml離心管均勻pipette 3.以1拆5去分盤 我的問題有以下4個 1.Passage2~3次後,隔天去看細胞幾乎全部都活化了 2.是否是繼代方法錯誤?還是中間步驟有需要改進的地方? 3.是否是medium中L-glutamine沒有再補充的原因? (原本medium中L-glutamine的濃度是足夠的) 4.是否是FBS的品質不夠好,還是Medium要買Liquid的? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 1.165.121.81

08/13 08:34, , 1F
我們家也是用刮的,10cm plate 用6ml去刮!都沒什麼問題@@
08/13 08:34, 1F

08/13 08:36, , 2F
我們DMEM用powder配的,內容的成分跟你的差不多
08/13 08:36, 2F

08/13 08:38, , 3F
25T用1ml去刮,medium可以cover住底部嗎?會有乾刮的情形?
08/13 08:38, 3F

08/13 09:31, , 4F
滿盤多滿啊 太滿也會活化 8分滿應該就差不多了
08/13 09:31, 4F

08/13 13:44, , 5F
n+1時確實有細胞過滿,且那時繼代時有乾刮的情況
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08/13 13:49, , 6F
之後有聽BCRC的建議,用75T和10ml的medium繼代
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08/13 13:50, , 7F
但是細胞還是都活化了@@
08/13 13:50, 7F

08/13 13:55, , 8F
不管是ATCC 還是其他單位的細胞 有再現性才是比較重要
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08/13 13:56, , 9F
來源已經都混亂不堪的情況下 要想的是怎樣和PAPER呈現一樣
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08/13 13:56, , 10F
或類似的結果 信心才會夠強
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08/13 13:57, , 11F
也有細胞在美國的實驗室 來台灣一直無法再現
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08/13 13:58, , 12F
光是實驗條件的掌控 就是很辛苦的部分 不過建議你
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08/13 13:58, , 13F
多跟幾個實驗室要 或許 會找到答案
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08/13 13:59, , 14F
無須花太多時間抓條件 很多時候是細胞本身的問題
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08/13 14:00, , 15F
要有效率的話 換細胞比較實際
08/13 14:00, 15F

08/13 22:23, , 16F
我用10cm dish 1/10比例去分 約兩天會五成滿 分盤 1/20可
08/13 22:23, 16F

08/13 22:26, , 17F
撐3天 5% FBS DMEM 五成大概會有1x10e7(兩天)三天會2x10e7
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08/13 22:28, , 18F
如果有3成活化就可以放棄那一盤 我是用刮的繼代
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08/13 22:28, , 19F
刮棒會用酒精消毒後reuse
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08/14 00:39, , 20F
繼代RAW細胞我都直接用DMEM沖細胞,沒有用刮棒耶
08/14 00:39, 20F

08/14 01:58, , 21F
請問一下 如何從細胞外觀判定RAW264.7細胞活化了呢?
08/14 01:58, 21F

08/14 08:20, , 22F
會成星狀,很多觸角
08/14 08:20, 22F

08/14 09:19, , 23F
謝謝U大回答 ^^
08/14 09:19, 23F

08/21 21:09, , 24F
換endotoxin-free或low endotoxin血清試試,但成本高很多
08/21 21:09, 24F

08/21 21:10, , 25F
以前我也養這株,嬌貴的丫…
08/21 21:10, 25F

08/22 16:03, , 26F
我們家是用BCS 比較沒有活化的問題 繼代用PIPETING的方式
08/22 16:03, 26F

08/22 16:03, , 27F
打下來 有開始活化的話明顯會比較難打
08/22 16:03, 27F
文章代碼(AID): #1I2Hycae (Biotech)
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