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[求救] 細胞培養液呈混濁狀，要如何找出感染源??

看板Biotech (生命科學)作者 (神父)時間12年前 (2013/08/16 13:41), 編輯推噓11(11推 0噓 28→)
留言39則, 16人參與, 最新討論串1/1
從兩個多月前開始，我們實驗室就飽受細胞汙染困擾 受汙染情況如下： 1.培養液呈現混濁。 2.放大到最大倍率觀察，會看到十分密集的半透明小顆粒在蠕動。 3.Medium色澤偏橘黃。 4.雖然遭受汙染，但細胞還是正常貼附生長，但經過長時間還細胞還是會慢慢飄起來。 5.做Medium+FBS空白培養都不會有事，一旦放入細胞培養會在1到2天後遭受感染。 第一次發現感染時我們只用漂白水+酒精將培養箱內部擦拭過，但不久後還是繼續感染。 第二次清理我們將整間culture room清理過，培養箱整台擦拭過，水盤也換新的水進去 所有使用過的Medium跟PBS也都重新配置，但只撐一個多禮拜又發生感染。 第三次我們卯起來清，整間culture room清理之後，將培養箱內部層板完全拆除刷洗， 但因為滅菌釜太小放不進層板，所以只放到Laminar Hood照UV燈一整晚，就連培養箱內 的HEPA濾網都換新的，所有以前配製的的Medium跟PSB全部倒掉，完全重配，在爆發感 染後所冰凍的細胞株全部清除禁止使用。 前天我解凍一株細胞，隔天看細胞貼附狀況良好，培養液無混濁，照慣例剛解凍的細胞隔 天要換上乾淨的Medium以維持細胞健康生長。 可是今天早上去看，培養液又混濁了...... 請問這到底是什麼樣的細菌所造成的汙染？ 有任何的方式可以檢測出汙染源或是斷絕汙染嗎?要不然我覺得這在怎麼用力清掃都沒有 用，我想就連換新的培養箱還是無解決。 順帶一提，我們culture room也有其他實驗室共用，只是他們用的是另一台培養箱，但從 沒聽說他們有任何感染發生。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.118.161.115
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08/16 14:18, , 1F
該不會是傳說中最惡毒的 mycoplasma....
08/16 14:18, 1F
推
08/16 15:21, , 2F
mycoplasma一般光學顯微鏡看不到= ="
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08/16 15:32, , 3F
吸液槍有清過嗎?
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08/16 15:33, , 4F
半透明是yeast嗎?
08/16 15:33, 4F
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08/16 16:15, , 5F
incubator上鎖
08/16 16:15, 5F
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08/16 16:18, , 6F
不然就是你的凍管有裂 你沒有注意到 解凍的時候髒水跑進去
08/16 16:18, 6F
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08/16 16:21, , 7F
現在你想要跟人家借incubator人家應該也不會想藉給你們
08/16 16:21, 7F
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08/16 16:21, , 8F
借
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08/16 16:22, , 9F
找不出原因的 cell culture汙染 十之八九是人為....
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08/16 18:35, , 10F
去拜拜
08/16 18:35, 10F
推
08/16 20:55, , 11F
waterbath
08/16 20:55, 11F
以前完全沒發生過這種情況，但自從爆發汙染後就一直壓不下來，因此培養細胞也變得也 一次比一次更小心，我本身已經是非常龜毛的人人了@@~尤其在做細胞實驗時，盡可能地 排除一切人為汙染的可能性。 剛剛我把受汙染的細胞以顯微鏡40x大小的倍率拍到以下畫面(請用1080p會比較清楚)： https://www.youtube.com/watch?v=Ws9kYfNhP8U
從比例尺來看每隻菌的大小約為2~10微米呈且長條狀，稍早會說他是半透明顆粒狀實在是 因為裡面的菌多到拍無法對焦.... 請問有人知道這是什麼菌類嗎??它的感染源可能來自哪邊??有什麼方法可以徹底斷絕污染 呢??跪求解答~~ ※ 編輯: ab10169ab 來自: 140.118.234.195 (08/16 21:27) ※ 編輯: ab10169ab 來自: 140.118.234.195 (08/16 21:29)
推
08/16 22:12, , 12F
看不太清楚,但你可以請別實驗室(確定沒污染的)分一盤
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08/16 22:13, , 13F
細胞給你,你直接放incubator
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08/16 22:15, , 14F
不過有點像桿菌就是了
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推
08/16 22:33, , 15F
你的medium有沒有加抗生素？
08/16 22:33, 15F
推
08/16 22:35, , 16F
細胞在凍之前就汙染了吧！要不要一次解三隻不同細胞看看？
08/16 22:35, 16F
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08/16 22:36, , 17F
或者拿三個不同時間凍的細胞來解看看，感覺汙染源並非由外
08/16 22:36, 17F
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08/16 22:36, , 18F
而內，而是本來就存在於細胞的，所以你外面怎麼清都沒效
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08/16 22:37, , 19F
若是你真的想要救，就P/S加到3%，然後每天換2~3次medium
08/16 22:37, 19F
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08/16 22:38, , 20F
每次換medium時用PBS多洗幾次看看吧
08/16 22:38, 20F
推
08/16 22:45, , 21F
看起來是細菌，跟別的實驗室借一盤確定沒有污染的細胞跟med
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08/16 22:45, , 22F
ium看是哪裡的問題
08/16 22:45, 22F
推
08/17 01:19, , 23F
放一盤純medium在incubator裡.看幾天後會感染.如果一直都
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08/17 01:20, , 24F
沒感染那就是你凍的細胞有問題,或是管裂掉解涷過程感染
08/17 01:20, 24F
推
08/18 11:08, , 25F
爆發感染後凍的細胞不用只是停損 真正的來源是之前凍的
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08/18 11:09, , 26F
細胞 1.解不同種細胞觀察 2.解不同時間點凍的細胞
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直到找到沒問題的時間點或細胞株為止
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08/18 11:10, , 28F
細胞株若都陣亡就要重新買或要 若查出時間點就解之前的
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08/18 11:10, , 29F
重新養個幾代存起來保種 污染的都處理掉
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08/18 11:11, , 30F
看你的描述跟處置過程 不是培養箱或medium及FBS的問題
08/18 11:11, 30F
推
08/18 16:30, , 31F
建議換一罐PBS及trypsin!!
08/18 16:30, 31F
推
08/18 19:54, , 32F
清一下pipette 可能是裡面已經污染了
08/18 19:54, 32F
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08/19 21:29, , 33F
這裡面的菌怎麼爬的神奇的快.......
08/19 21:29, 33F
推
08/23 12:20, , 34F
建議一:laminar flow請人來校正清理(排除hood問題)
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08/23 12:20, , 35F
建議二:medium在配置好後再過濾一次 有時候serum品質...
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建議三:裝個監視錄影機...
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08/23 12:23, , 37F
如果test純medium沒長不代表一定不是medium汙染哦 有時候
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08/23 12:24, , 38F
汙染源會需要細胞代謝才會爆發 我是覺得比較像hood掛點了
08/23 12:24, 38F
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09/17 07:15, , 39F
這細菌真的動得比我看過汙染的菌快很多XD 生命力旺盛
09/17 07:15, 39F
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