[求救] 買來的蛋白質(CYP17A1)沒有heme...

看板Biotech (生命科學)作者 (~"~)時間12年前 (2013/10/23 04:45), 編輯推噓0(004)
留言4則, 3人參與, 最新討論串1/1
各位好,小弟不才為化學系學生。之前跟生技廠定了一條重組蛋白想做ligand binding titration的實驗。該蛋白質是細胞色素P450 17A1 ,ligand會binding 在蛋白質中heme上,但是買來的蛋白質,實驗上一直測不到heme UV的訊號,追問廠商之後才知道他們在用大腸桿菌的表達時,沒有加ALA,所以合成蛋白質根本沒heme,……由於蛋白很貴不可能重買,該實驗又不得不做,因此想請問各位有可能用類似轉譯後修飾的方式加上heme嗎?例如加入過當量的heme至蛋白質中再離心純化…(目前文獻查到大多是在細胞階段導入) 不知到各位先見有什麽建議和想法呢?…真是十分苦惱啊QQ -- Sent from my Android -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 42.75.85.93

10/23 05:23, , 1F
我對這個protein不熟,只知道一般蛋白如果從Ecoli純化後要還
10/23 05:23, 1F

10/23 05:28, , 2F
原它的PTM不如砍掉重練比較快;你的方法若paper有試過或許ok
10/23 05:28, 2F

10/23 08:23, , 3F
看有沒有辦法跟廠商減價購買,如果對方有疏失的話
10/23 08:23, 3F

10/23 10:22, , 4F
先跟他盧看看阿 他們vector還有的話重做很容易
10/23 10:22, 4F
文章代碼(AID): #1IPkFRc- (Biotech)
文章代碼(AID): #1IPkFRc- (Biotech)