[求救] 懇請高手指導Flow的compensation設定

看板Biotech (生命科學)作者truthPP (就是真理)時間12年前 (2013/10/23 20:25)推噓1(1推 0噓 4→)

留言5則, 3人參與討論串1/1

各位賢拜好！想請教一下常做雙染的高手一些關於compensation的問題我先簡述一下我的實驗設計我的實驗本身是在做細胞Autophagocytosis 將一種細胞以apoptosis inducer誘導apoptosis之後看活的細胞能否將凋亡的同種細胞進行apoptosis 用的大概方法如下 1.將活細胞以PKH67細胞膜染劑(綠螢光)進行染色 2.將欲被吞噬的活細胞或死細胞以PKH26細胞膜染劑(紅螢光)進行染色 3.各別以BSA進行染色反應中止 4.將兩種染好色的細胞混和進行吞噬 5.吞噬反應完成後wash再回溶上Flow以雙染進行測定其中在實驗組別在實驗中欲看細胞死亡是否會造成活細胞autophagocytosis有所增加因此我以活細胞吞活細胞的組別為control 另設計下列四管用以調整flow設定 1.兩種細胞均不染色 2.活細胞染色(PKH67) 欲被吞噬活細胞不染 3.活細胞不染欲被吞噬活細胞染色(PKH 26) 4.雙染Control 先上1.調整FSC.SSC.FL1-H.FL2-H至理想設定之後這些設定就不動了再分別上2.3調整Compensation 最後再上雙染control看設定有無跑掉之後就跑各實驗組別但調整過程中卻發現 3.單染欲被吞噬活細胞染PKH 26這管 (檔案中的第二張圖) 怎麼調Compensation都沒辦法調進FL1-H到10^1以內但調另一管單染活細胞的compensation(第三張圖) 卻可以很快的將FL2-H調到OK的程度在不得已的狀況下在分析時只好把十字往右拉再來看Double positive(表示細胞有被吞噬)的比例想請問一下這樣的狀況要如何調整設定? 很怕這樣定量出來的data不準... 我把實驗的圖檔以下列連結分享 http://ppt.cc/3MhU 另外我也找了一篇也是用這個染劑來做吞噬實驗的paper 讓各位高手來對照他的圖來看我是否有地方沒注意到 paper如下 http://ppt.cc/bvU2 主要是裡面figure 4和6這兩張圖麻煩各位高手指導謝謝大家(跪~) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.78.86 ※ 編輯: truthPP 來自: 120.126.78.86 (10/23 20:38) ※ 編輯: truthPP 來自: 120.126.78.86 (10/23 20:38)