[求救] 收protein濃度很低
如題 protein抽出來濃度極低阿
濃度都是1ug/ul 上下遊走 loading量真的很大 >"<
但是沒有錢買任何濃縮的kit ，所以只能想辦法改善問題
首先實驗室現在用RIPA lysis buffer with 0.1%SDS 但是之前沒有SDS
抽出來的protein量就比較多 還是是SDS影響?
還有大家都如何抽出高濃度的protein?
再來lab實驗步驟是
6cm dish 的細胞 PBS wash後吸乾
直接加100ul lysis buffer刮下來
然後放置4℃ 於旋轉盤上轉15min
之後離心取液體部分
但有些問題就是加了有些特定藥物離心的pellet會呈現黏稠狀
(但是我收之前觀察細胞沒死還滿滿的，MTT assy 也跟control組差不多)
像這樣黏稠的pellet 通常刮細胞時有就呈現鼻涕樣的黏稠狀
這樣又是為甚麼?
希望大家幫我解答 謝謝了 :)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.85.162
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所以是刮下來後sonication再去轉
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我也是有多加過但是濃度一樣低
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請問你們6cm都加多少呢?
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但是DNA跑出來都只限於我加了藥後的細胞，而且其他人沒DNA跑出來這困擾
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好低 :)
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我知道是黏稠是DNA，但是因為同時間收的都只有加了藥的sample才這樣，所以才想
問一下看看是否有其他見解， 至於加100ul 是我們lab歷屆來學長姐都這樣做也是
沒問題，以前用沒有SDS的lysis buffer濃度也不錯
推
11/07 11:44, , 10F
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跟我們家一樣甚麼都自己泡，窮實驗室只能這樣，那你加70ul 濃度還可以嗎?
※ 編輯: mango1986 來自: 140.123.85.162 (11/07 14:16)
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