[求救] 抗體非特異性結合BSA

看板Biotech (生命科學)作者brigand (台灣加油)時間12年前 (2013/11/12 00:15)推噓2(2推 0噓 7→)

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我最近在做Nox1 68Kd 都是用sigma 或是genetex抗體在偵測但是有一次跑了一個實驗，用這支抗體去偵測 20ng, 200ng以及2000ng的BSA 結果居然出現約65-70kd band在200ng以及2000ng的樣品上版上的大大有沒有什麼好建議，排除我之前做得結果都是BSA的可能性？謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 158.93.6.11

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blence

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推

joseph103331

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joseph103331

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joseph103331

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樣品就是細胞，養在含5%FBS的ebm-2培養基裡，再取細胞的時候，就是直接把培養基抽掉，加入Lysis buffer。然後取Lysate直接跑膠。 BSA 則是溶在水裡後直接加loading buffer，然後跑膠。因為之前是把BSA加入培養基去刺激Nox1表達，所以老闆覺得有沒有可能之前偵測到的Nox1都不是真的，都是BSA......然後就直接用BSA 跑膠看看，沒想到還真的偵測到Band。現在就是直接用老的lysate跟200ng的BSA一起跑，然後用兩個抗體做看看，也許就只是non-specific binding而已，只是讓大家很意外，怎麼會BSA也會被Nox1抗體偵測到，兩個Protein幾乎是不相同的Protein耶，真不知道怎麼解釋...... ※ 編輯: brigand 來自: 158.93.6.11 (11/12 04:01)

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blence

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blence

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puec2

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