[求救]stable cell line

看板Biotech (生命科學)作者 (可愛的Comomo)時間12年前 (2013/11/14 00:49), 編輯推噓5(5024)
留言29則, 7人參與, 最新討論串1/1
各位大大好 我最近在建立stable cell line (使用HEK293) transfect plasmid into cells後24hr 我換fresh的medium後(第二天) 隔天繼續讓cells長多一點(第三天) 在這幾個步驟間我都有觀察發螢光cells的比例 第二天及第三天比例都有在70% 但第四天準備要加G418篩選前 發現螢光cells的比例卻降低至20%左右 不知為什麼會這樣? 還是這是正常現象? 請各位大大能幫忙解惑 謝謝大家! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 58.114.221.18 ※ 編輯: Marrisay 來自: 58.114.221.18 (11/14 00:56)

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是transient transfection?時間過就會開始下降
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episome
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就一樓說的...去蕪存菁
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剩下會亮的 20% 不是一開始吃了特別多 plasmid,就是已
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經嵌入 genomic DNA 變成 stable clone 了。
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順帶一提,我連用帶有SV40 ori的plasmid轉到293T中,經
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過6天也只剩下10%不到......
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不錯的資訊
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可以試試看用infection建立stable clone
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沒差吧 反正都要用挑的
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我給個方向吧:Scaffold/Matrix Attachment region
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等我回到研究所之後我打算用這個做做看,這是用episome
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建立stable clone的方法,但是現在用這個技術的研究還不
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普及。
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S/MAR其實一陣子了喔...至少聽聞Stanford已經做很開心去了
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1990 就有啦~ 但是我沒有看到很多用S/MAR做長時間over
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expression或knock-down的paper。
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現在最紅的是TALEN
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之前不是還有transposon,睡美人或piggyBac之類的也行
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但是那些都會插到genomic,有可能會改變genomic的表現
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那就多挑幾個啊... transgenic plant還不是一樣...
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TALEN的優勢是你可以決定要插哪裡呦
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理論上是不會亂插 >///<
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怕就是怕在好死不死選到有功能的區域......很多序列到底
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有什麼功能其實也都還未知,就算序列真的沒功能,也可
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能改變DNA長度讓某些regulation elements異常,所以我才
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比較喜歡episome (ˊ _>ˋ)
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用TALEN你可以直接插在你要改變的基因上阿...
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那來個AAV如何?
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文章代碼(AID): #1IWws62c (Biotech)
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