[求救] 有關於非E.Coli系統的competent cell製備方法

看板Biotech (生命科學)作者 (武家傳奏)時間12年前 (2013/12/09 11:51), 編輯推噓1(107)
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在下目前要進行E.Coli以外的菌種的competent cell的製備 目前要做的菌種有Bacillus sp., Pantoea sp.,以及Sphingomonas sp. 以便接下來進行transformation的步驟(heat shock的) 雖然已經嘗試使用一般E.Coli的勝任細胞製作法(CaCl2的方式) 並且以抗生素Amp進行篩選 但感覺transformation之後效率不高,或者是之後的plasmid DNA萃取上沒有目標物 著實困擾 於是想請問一下版上的大大們 對於E.Coli以外的菌種Competent Cell 製備是否有其他的方式可以進行 以及是否有其他要注意的地方或細節 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.130.9.8

12/09 14:53, , 1F
不會查paper?
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12/09 15:44, , 2F
paper有查過了,但他那邊是用電穿孔,而不是heat shock
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12/09 15:52, , 3F
就是因為不好送才不用化學法......
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12/09 15:58, , 4F
嗯...目前是有操作過轉型前跟轉型後的塗盤(with Amp),轉型
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12/09 15:59, , 5F
前沒有colony出現,而轉型後的有出現,這樣算是成功嗎?還是
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這種為Psudo的情況?
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12/09 16:19, , 7F
g+細菌用化學法要先處理成protoplast不會比較好用
12/09 16:19, 7F

12/09 16:21, , 8F
而且不是所有細菌都可以處理成有competence能力
12/09 16:21, 8F
文章代碼(AID): #1IfJumZF (Biotech)
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