[求救] western blot 做膠

看板Biotech (生命科學)作者 (藍雨飄楓)時間12年前 (2013/12/15 12:38), 編輯推噓9(908)
留言17則, 13人參與, 最新討論串1/1
小弟最近要跑分子量 170kDa的蛋白 做膠時網路查到是用7.5% 但是實際操作後 發現gel很難凝固.. 想請問一下有人有做過那麼大分子量的Western嗎? 可以建議配膠濃度可以給小弟嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.53.153

12/15 15:06, , 1F
不凝固先從APS TEMED開始抓問題吧
12/15 15:06, 1F

12/15 17:38, , 2F
是用29:1的acrylamide嗎? 常用的37.5:1配低濃度比較難凝!
12/15 17:38, 2F

12/15 18:35, , 3F
"常用的37.5:1"....明明這個比例就沒什麼人用
12/15 18:35, 3F

12/15 19:52, , 4F
不會啊…周遭的人都用37.5:1
12/15 19:52, 4F

12/15 20:16, , 5F
29和37.5都很常用..我想是APS放太久了 或者膠冰太久
12/15 20:16, 5F

12/15 20:17, , 6F
Acrylamide+buffer配好冰太久會凝得很差
12/15 20:17, 6F

12/15 23:23, , 7F
應該不會有這種問題 可能天氣冷凝比較慢?
12/15 23:23, 7F

12/16 01:05, , 8F
我的160kd是用8%就好,7.5%是給250kd用的,不過你應該放配方
12/16 01:05, 8F

12/16 11:30, , 9F
blence好兇>< 我們平常都用37.5, 29是之前有人做4%native
12/16 11:30, 9F

12/16 11:31, , 10F
gel凝不起來才買來用的@@
12/16 11:31, 10F
謝謝各位!! ^^ 最後發現是APS問題 ※ 編輯: xhunterx 來自: 120.126.53.153 (12/16 22:00)

12/16 22:28, , 11F
APS最容易壞 建議一段時間就重配一次
12/16 22:28, 11F

12/17 04:37, , 12F
APS每次新鮮現配最好 不會花太多時間的
12/17 04:37, 12F

12/17 07:50, , 13F
現配的最好
12/17 07:50, 13F

12/17 10:02, , 14F
APS配好後分裝凍-20保存,使用中的就放4度
12/17 10:02, 14F

12/18 01:10, , 15F
180用10%都馬可以跑....
12/18 01:10, 15F

12/23 12:45, , 16F
配到6%都會凝,只是會很軟,TRENSFER要非常小心破掉
12/23 12:45, 16F

12/24 23:16, , 17F
之前有遇過沒加Bis
12/24 23:16, 17F
文章代碼(AID): #1IhJ8eir (Biotech)
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