[求救] qPCR檢體放於冰桶上太久是否會影響結果

看板Biotech (生命科學)作者 (無心)時間12年前 (2013/12/27 13:09), 編輯推噓2(2012)
留言14則, 5人參與, 最新討論串1/1
最近又發生positive control無法順利產生signal的囧境 今天因為想省時間, 想和同事一起上機 當我把qPCR的reagent全部都加好後, 放在冰桶上(沒有插在冰裡)將近一個小時 同事的結果有出來...但我做的所有檢體皆無訊號 到底是我的reagent出了問題?? 還是Taq enzyme在室溫太久已經沒有活性了?? 請問各位前輩有沒有這種經驗.. 麻煩幫忙解惑一下 感恩 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.96.146.109

12/27 21:26, , 1F
Taq能拿來跑PCR溫度上上下下一兩個小時都撐的過去了
12/27 21:26, 1F

12/27 21:27, , 2F
只是放室溫一小時就算有影響也不至於會到沒有訊號
12/27 21:27, 2F

12/27 23:14, , 3F
還是sybr壞了
12/27 23:14, 3F

12/28 00:44, , 4F
那個廠牌的機器? abi可以讀原始檔判斷狀況
12/28 00:44, 4F

12/28 20:22, , 5F
重做了一次...PC還是沒出來...完全理不出頭緒...
12/28 20:22, 5F

12/28 20:23, , 6F
難不成又是primer的問題??明明之前做72度就很順
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12/28 20:23, , 7F
annealing硬是被改到64度...這應該無關吧!!
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12/30 01:32, , 8F
Annealing溫度才是重點吧? 與primer Tm值密切相關
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12/30 08:38, , 9F
照前輩的說法..每次合成primer(一樣序列)..
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12/30 08:39, , 10F
annealing溫度都要重新捉...超怪的...
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12/30 08:39, , 11F
我拿的這批primer之前72度做都沒事
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12/30 08:40, , 12F
但前輩合成的新primer...72度做不出來..改成64度.就很怪
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12/30 17:53, , 13F
第一次聽到這種說法ORZ Tm影響最大的除了seq還有所用的
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12/30 17:53, , 14F
polymerase & buffer種類
12/30 17:53, 14F
文章代碼(AID): #1IlGjmVz (Biotech)
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