[求救] C2C12培養及S.A Beta-gal問題
自從學姐畢業後就問題不斷阿(淚
我們實驗室長期使用C2C12 cell
之前我在培養時也沒什麼問題
但是最近細胞只要一回溶完
經過一次passage後 細胞就會變得很奇怪
看起來就是有點傾向老化，細胞會攤成一片的樣子
或者是會變得細細長長的，從細胞邊緣會延伸出很長一條
這樣下去根本不知道細胞能不能用(淚
使用的medium:
DMEM
10% FBS
4mM L-glutamine
1% P/S
此外
最近我的S.A Beta-gal也染不出來(嘆
用的是sigma的Kit
Protocol:(6孔盤)
1.PBS wash 2 times
2.加入1.5ml 1X Fixation buffer 靜置6-7min
3.配6ml staining solution mix:
10X staining solution 600ul
reagent B 75ul
reagent C 75ul
X-gal solution 150ul
滅菌水 5.1ml
避光配製，過0.22filter，調pH到5.9-6.0之間
4.PBS wash 3 times，洗掉fixation buffer
5.每well加入1ml的staining solution mix
6.封parafilm1，包鋁箔在37度incubator(無CO2) 放置1-2天
7.用PBS wash後，用70% glycerol保存
不知道為什麼都染不到東西，就算有也只有1.2顆
有些很明顯老化的細胞竟然也都沒染到!!
請各位版友幫我看看是否有哪些我沒注意到的問題
謝謝!!!
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