[討論] western blot的大片不均勻背景來源

看板Biotech (生命科學)作者LIAR (玻璃做的大叔)時間11年前 (2014/01/19 20:48)推噓0(0推 0噓 3→)

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我之前有找過western背景的討論，有像是blocking不全、沒溶完、wash不好等等而我目前做過一個小測試。 ECL的操作：把ECL的液滴丟在塑膠盤上，把膜丟進去泡幾十秒，然後翻面兩次，就放到黑色塑膠盤拿進UVP，沒有蓋投影片。 http://i1109.photobucket.com/albums/h424/LIAR2K/Clipboard_zps3b211291.gif

這是同一組4片膜，用UVP拍三次(上到下)，最上面很明顯左邊有黑邊，然後我拿出來加ECL，再繼續拍，結果是中間的結果，左上的黑區塊不一樣。最後.....我啥也沒做，連UVP的門都沒開，繼續用UVP再拍一次，結果就是最下面的結果，感覺就均勻多了。看來ECL確實有影響，至少其他變因都是固定的，但還是有兩個問題我不懂： 1.如果拿出來看ECL的分布，和背景的黑白沒有相關性，並非ECL聚集的地方背景就高。很久之前我也有做過蓋投影片的測試，好像也沒影響。 2.如果ECL分布有影響，中間和下面的結果應該要一致，但是重拍卻變比較均勻了，似乎也說不過去。之後幾次我把膜擺到盤子上面後，會把ECL繼續滴到膜上，變成上面都有一層ECL，背景就很一致，拍起來很漂亮，當然次數不夠多所以不敢保證，我想請問各位對於這種不均勻的背景有甚麼經驗是哪裡造成的嗎？ -- 起初，他們追殺共產主義者，我沒有說話，因為我不是共產主義者；接著，他們追殺猶太人，我沒有說話，因為我不是猶太人；後來，他們追殺工會成員，我沒有說話，因為我不是工會成員；此後，他們追殺天主教徒，我沒有說話，因為我是新教教徒；最後，他們奔我而來，卻再也沒有人站起來為我說話了。《First They Came（他們首次來時）》，Martin Niemoller牧師（1892-1984） -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 180.176.42.46