[求救] 詢問primer dimer相關問題
請問有人發生過同樣的PCR條件...原本不會出現primer dimer
但最近開始出現淡淡的primer dimer
前輩做的有時甚至會壓過原本我們想要P的product
雖然在我的觀察中...似乎當templete濃度太高時，或NTC時primer dimer比較容易形成
但回去看幾天前的結果...似乎都沒有primer dimer出現
也有重新配primer mixture...還是一樣有primer dimer
因為接下來要進入qPCR...所以想請問各位有沒有關的經驗
唯一能想到的也只有primer freeze thaw的差異...
有可能因為冷凍解凍太多次而產生primer dimer嗎??
PS:我們已選用hot start Taq polymerase enzyme...
而且PCR第一步就是94度7分鐘...照理primer dimer應該會解掉吧??
如果大家有任何經驗， 煩請告知改進方案
感恩
祝
新年快樂
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