[求救] 細胞表面接受器偵測
最近在做肝癌細胞表面蛋白偵測
使用流式細胞儀來進行偵測
希望細胞在加藥處理後，細胞表面的接受器會增加
目前到的問題是:
實驗已經進行3次以上，但是結果並不穩定
有時會增加，有時沒有變化
有時control的值在不同次的實驗中，飄移(增加)有點多
因為已經有另一實驗結果可佐證表面接受器有增加的情況
所以我認為FLOW做出來的DATA應該也會增加才是
我的實驗步驟為:
1. 細胞seeding 24小時後，加藥處理
2. 加藥24小時後，收集細胞，上機
收集細胞步驟:
1.PBS wash細胞，利用trypsin將細胞切下，收集於離心管中
2.離心後，移除上清液，利用含有1% FBS的PBS沖洗細胞，離心 (此步驟進行兩次)
3.移除上清液，用含有1% FBS的PBS沖散細胞，靜置於冰上20分鐘
4.離心，用PBS將細胞打散，加入抗體，避光並靜置於冰上45分鐘
5.離心，移除上清液，用PBS沖洗細胞 (此步驟進行兩次)
6.離心，移除上清液，加入適量的PBS沖散細胞，上機
不知步驟是否有可改進之處? 或是有其他可改善的方法?
請各位版友不吝指教~感謝!
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