[求救] 膜蛋白的分離

看板Biotech (生命科學)作者 (快樂就好)時間10年前 (2015/09/08 13:06), 編輯推噓2(207)
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不好意思,有收尋過板上文章和pudmed文獻都沒有看到類似的文章, 我現在的實驗是將肺組織的gp91phox從細胞膜上分離,使用Thermo的Mem-PER Membrane Protein Extraction Kit,我照他的protocol去分離組織上的膜蛋白並跑western blot, 但是奇怪的是分離出來的細胞質蛋白比細胞膜多,可是我是分離膜蛋白(已確認沒有分錯管 ,也已重複實驗四次),老師說有可能是老鼠犧牲後組織放在負80度C冰箱, 導致細胞破損,我怎麼樣都找不到相關的文獻,不知道是不是真的有影響?有沒有人有這 樣的經驗?感謝 -- ★ crazydog 好啊!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.64.80.31 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1441688812.A.6E9.html

09/08 16:32, , 1F
user guide的Troubleshooting 第一點有試過了嗎?
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09/08 16:33, , 2F
09/08 16:33, 2F

09/08 17:49, , 3F
所以我要減少取質的步驟中incubation的時間??
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09/09 08:15, , 4F
Permeabilization可能不完全 增加incubation時間
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09/09 08:17, , 5F
或者做個homogenization看要用磨的,凍的,還是過針筒都能試
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09/09 08:19, , 6F
因為組織非均質狀態,要讓所有細胞都開洞,讓細胞質流出
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09/09 08:22, , 7F
條件可以再試試
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09/09 13:15, , 8F
我有用組織均值機去磨碎了 那我增加他的作用時間好了
09/09 13:15, 8F

09/09 13:16, , 9F
這樣說來其實跟凍不凍負八十度C無關了
09/09 13:16, 9F
文章代碼(AID): #1LxcpiRf (Biotech)
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