[求救] Stripping 時間?

看板Biotech (生命科學)作者 (紙飛機啊歐歐踢欸死)時間10年前 (2015/09/30 13:24), 10年前編輯推噓4(408)
留言12則, 4人參與, 最新討論串1/1
最近在做Western 想試試同張膜重Hy抗體 我們家Stripping Buffer是自己泡的~ pH是6.7 膜是PVDF膜 昨天剛照完冷光,想要洗一下重新Hy Actin 但翻遍實驗室的protocol...只有找到怎麼泡阿 QAQ!!!! 上網查跟問同學 好像 要加熱? 還有看到廠商賣的只要stripping 五分鐘? 想請問版上大大~ 通常自己泡的Stripping buffer,會怎麼使用呢? 加熱的意思是 整罐裡面丟stir 放加熱器上加熱 再淋在膜上嗎 囧? 我查Stripping時間大概都在30分鐘內, 那結束後是從blocking開始,還是直接就可以Hy一抗了呢? 有需要我後續再補上完整配方~!! 感謝各位大大 >_< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.135.61.97 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1443590668.A.82F.html ※ 編輯: grassshan (140.135.61.97), 09/30/2015 13:25:50

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我們家是整罐裡面丟stir 放加熱器上攪拌均勻再淋在
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膜上。
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Stripping放在60度水浴槽30分鐘,結束後是從blocking
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開始,再Hy一抗
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時間要依前一隻強度調整哦!
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我家是50度7分鐘 strip完在用tbst洗5分鐘3次 之後blo
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ck
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wash 3次很重要!!不然第二隻抗體會爆炸
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記得之前看過一篇文章是說stripping不如重跑一張XD
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如果只是test antibody倒是還好,定量就...
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11/03 19:17, , 11F
有用過跟廠商買的,用室溫三分鐘即可,還被我們拿來reus
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11/03 19:17, , 12F
e,效果還不錯
11/03 19:17, 12F
文章代碼(AID): #1M2t8CWl (Biotech)
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