[求救] PPAR gamma IHC染色方法
各位學長姐好
不知道有沒有人染過PPAR gamma的IHC(可見光或螢光)
我已試過無數種方法卻還是沒有成功
讓我人生陷入困境
以下為我的可見光染色方法
希望有經驗的學長姐能過指點迷津
(若因實驗方法不希望被公開，麻煩站內信我)
1.脫蠟(不在贅述)
2.煮片：10mM sodium citrate buffer pH6.0煮65度1小時
我同時也有試過以commercial的鹼煮65度1小時
3.冷卻20分鐘
4.PBST洗3次
5.blocking：1%BSA+1%goat serum 30分鐘
我同時也有試過+10%goat serum
6.一抗(1:100)4度冰箱overnight
7.回溫30分鐘
8.PBST洗5次
9.二抗(1:500)30分鐘
10.PBST洗5次
11.DAB呈色5分鐘
12.ddH2O終止反應
13.Hematoxylin 2分鐘
14.PBS洗
15.烘乾
16.封片
我同時也有試過以trypsin42度煮5分鐘，並利用2%Triton打洞10分鐘
仍然未見效果
希望能給我一盞明燈
謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 42.74.12.28
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