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[求救] transfer 過頭?

看板Biotech (生命科學)作者 (有人試我的密碼，幹)時間9年前 (2016/07/30 23:02), 編輯推噓4(4推 0噓 10→)
留言14則, 7人參與, 最新討論串1/1
昨天傍晚跑了兩片8% SD-PAGE， 下班前，用濕式transfer，跑30V, 4C cold room, overnight 我們實驗室都這樣做transfer，都還蠻正常的。 但是今天白天來收的時候，發現PVDF上連prestained marker都看無 電極應該沒接反。 所以今天整天立刻重新配gel，8% SDS-PAGE 75V 跑約3小時 又做一次transfer, 趕時間所以改100V, 4C cold room, 1hour, 就在剛剛，打開一看，一片看的到marker, 另一片依然乾乾淨淨， 用ponceauS, 還真的很乾淨， 我們用的是 Amersham Hybond 0.45um PVDF 看板上之前的討論，會不會過頭好像是看孔徑， 請問這PVDF會容易跑過頭嗎? 不過印象中，以前也沒這樣過。 這次比較異常的是，以前我100V, 1hr, 結束後，buffer會還冰冰的 因為還放冰袋+周圍放一堆冰 但是這次有點溫溫熱熱的。也不知道會不會是tank有問題。 我們用完tank就只會用水沖一沖，還是要泡dd water?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.40.72 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1469890934.A.F1D.html
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07/31 03:53, , 1F
我都 110V 跑 110 minutes，不會過頭啊。有沒有可能你插
07/31 03:53, 1F
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07/31 03:53, , 2F
反了？
07/31 03:53, 2F
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07/31 03:54, , 3F
我 tank 也是水沖一沖而已
07/31 03:54, 3F
推
07/31 09:45, , 4F
buffer配錯?
07/31 09:45, 4F
推
07/31 09:47, , 5F
PVDF有過Methanol再用嗎?
07/31 09:47, 5F
推
07/31 18:38, , 6F
gel有先泡 transfer bfr才夾三明治嗎
07/31 18:38, 6F
推
08/01 00:06, , 7F
一片 membrane 跑90分鐘，原則上 membrane 1cm2 用1mA。
08/01 00:06, 7F
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08/01 00:18, , 8F
第二次確定沒放反，pvdf有用methanol先泡，在用transfer buf
08/01 00:18, 8F
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08/01 00:19, , 9F
洗過。30.3g glycine, 6.06g Tris-HCl, +200ml methanol
08/01 00:19, 9F
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08/01 00:19, , 10F
這應該沒錯吧
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08/01 06:51, , 11F
這配方濃度跟一般用的不同
08/01 06:51, 11F
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08/01 09:29, , 12F
是配1X? 跟一般用的buffer濃度多了兩倍量
08/01 09:29, 12F
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08/01 09:55, , 13F
配1L, 1x
08/01 09:55, 13F
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08/01 09:57, , 14F
OMG, 我看錯了，這配方是2L的，感謝各位的幫忙
08/01 09:57, 14F
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