[求救] 詢問zygote 做in situ hybridization
今天開始拿zygote 做ISH
我發現，以前用 paraformadehyde fix，在換到100%甲醇保存在-80度C的mice zygote。
zygote從PCR tube 裡面弄出來，超級難吸的。
還有後面每的步驟偷痛不欲生。請問各位前輩都置換zygote的buffer?
下面是我的每個步驟:
用200ul pipette 從 PCR tube 吸出裡面的胚胎(沒法知道有沒有吸完胚胎)，
放進已經加好95% 甲醇(with 5%DEPC泡成的 1倍PBS)，然後用mouth pipette
一步一步換成100% EDPC泡成的 1倍PBS。
再換到 50mM Tri-HCl ph=7.5 with 20ug/ml protein kinase 做Antigen retrival
37度C 10分鐘
再用mouth pipette 吸到 由DEPC泡成的 1倍PBS wash 5次!!
在用乙醇一步一步換成100%乙醇，然後air dry (我忘記用乙醇來置換，就直接pre-hy了)
接著在pre-hybridize 65度C 1 hour
然後才hybridize overnight in 65度C
置換zygote 真的有夠難的，我有嘗試把buffer吸乾，在加入下一個步驟的buffer。
似乎有比較好一點點，可是乙醇的脫水依舊會碰到不好吸乾的問題
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
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