[求救] transfection後細胞長不好
大家好
上一篇剛好有人問了類似的問題 不過和我的情況不盡相同
也已經爬過文了 所以就另開一篇發問
最近使用HCT116細胞transfect shRNA (plasmid) 到10cm的dish中
使用的是K2 reagent這個牌子 所有transfect的量都是按照原文protocol建議
Day0的時候放入1000000(100萬)顆細胞到dish當中
24小時後用15ug plasmid以及30ul reagent來做transfection
再過24小時之後換成complete medium
然後老師是建議我在72小時的時候收細胞這樣
但是看到有幾盤都是呈現要死不活的狀態 收下來量都不多
這一次就是GFP還有sh-control兩盤看起來最慘，很多細胞都浮起來
其他shRNA收下來的量甚至比control還多
1.這樣是不是表示我這次已經失敗(因為shcontrol量還更少)
不過我還是會跑wb看看蛋白質
2.實驗室的助理用相同條件transfect細胞都長的ok，我想不出哪邊和他不一樣
他有說可能是我的DNA有問題，但是我之前也成功transfect過長的很好的GFP
3.因為用來繼代的那盤細胞長的非常正常，我認為是transfect出了問題
不知道有哪邊有問題請大家幫忙 ><
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