[求救] 關於利用抗性基因篩選轉型珠的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (gryffin)時間9年前 (2016/08/30 09:17), 編輯推噓1(1011)
留言12則, 7人參與, 最新討論串1/1
各位前輩好 小弟最近在篩選轉型珠時不時會遇到一個問題 在此提出望有類似經驗者可以一起討論、解答 我將目標基因 以兩個序列不同的切位 放在帶有抗性基因的質體上 並轉型後藉由抗生素培養基進行篩選 但在含有抗生素的培養基上得到菌落後 對 14 顆菌落 Colony PCR 都沒有目標基因(Positive control 顯示 PCR 沒有問題) 同時我有做一個未放質體的轉型 Negative control 在抗生素培養基上沒有菌落,所以抗生素應該沒有問題 那就奇怪了@@ 請問有人有相關經驗嗎 謝謝 ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.209 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1472519842.A.C70.html

08/30 09:58, , 1F
這很正常阿,那顆plasmid沒切乾淨
08/30 09:58, 1F

08/30 10:05, , 2F
vector自接, 所以沒有insert
08/30 10:05, 2F

08/30 12:21, , 3F
colony PCR false negative,不死心就抽mini再做一次PCR
08/30 12:21, 3F

08/30 16:26, , 4F
一樓正解 還有insert 切不完全 加太少 也有可能
08/30 16:26, 4F

08/31 00:58, , 5F
可是我有切膠純化,還是說還是有可能純化到沒切到的嗎?
08/31 00:58, 5F

08/31 02:33, , 6F
個人經驗是 細菌會做很多亂七八糟我們還不知道的事
08/31 02:33, 6F

08/31 02:34, , 7F
看你是想要把你的plasmid做出來 那就多做幾次XD
08/31 02:34, 7F

08/31 02:35, , 8F
反正你只需要一顆對的
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08/31 02:35, , 9F
還是你想鑽進去研究可能發生什麼事情 也許下一個諾獎
08/31 02:35, 9F

08/31 02:36, , 10F
就是你
08/31 02:36, 10F

08/31 06:58, , 11F
用什麼RE?處理程序如何?RE端有多幾個bps?
08/31 06:58, 11F

08/31 22:06, , 12F
L大說的也是啦XD
08/31 22:06, 12F
文章代碼(AID): #1NnDwYnm (Biotech)
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