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[求救] Western抗體reuse保存

看板Biotech (生命科學)作者 (球)時間9年前 (2016/08/31 18:00), 編輯推噓8(8推 0噓 25→)
留言33則, 12人參與, 最新討論串1/1
如標題，想請問大家到底抗體reuse的保存方式怎麼樣最好呢？ 上網查資料發現大家都是建議加sodium azide保存在四度 不過都是寫可以reuse三到五次 我們實驗室則是把抗體放-20 reuse，當然Freeze thaw cycle應該很傷 可是也常常可以reuse超過五次(internal control 甚至用了20次左右) 想請問實際使用上加Sodium azide保存四度到底可以reuse多少次或是放多久? 究竟怎麼樣保存最好呢? 感謝大家! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.113.136.218 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1472637649.A.257.html
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08/31 19:40, , 1F
看抗體效價和milk/BSA新鮮度。3-5次是一般（-20度）。
08/31 19:40, 1F
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08/31 19:53, , 2F
沒用過sodium azide,至於-20,可reuse效果跟你一樣
08/31 19:53, 2F
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08/31 22:12, , 3F
想問問抗體是指milk泡製完，冰在-20，也只reuse4-5次嗎
08/31 22:12, 3F
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08/31 22:12, , 4F
？
08/31 22:12, 4F
推
08/31 22:23, , 5F
我是配在BSA裡的加sodium azide後 冰4度 沒長沉澱物就一
08/31 22:23, 5F
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08/31 22:23, , 6F
直用...或Hy出來太弱就加一點新抗體跟BSA buffer(有冰半年
08/31 22:23, 6F
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08/31 22:23, , 7F
一年還在用的...哈哈) 配在牛奶裡的則可能1-2個月就分層
08/31 22:23, 7F
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08/31 22:23, , 8F
變色長東西 就丟了
08/31 22:23, 8F
推
09/01 00:56, , 9F
同樓上用法，冰一年也沒事～
09/01 00:56, 9F
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09/01 01:06, , 10F
所以中間一直有reuse用一年沒問題這樣？
09/01 01:06, 10F
推
09/01 02:23, , 11F
想請問加sodium azide的目的是什麼？一定需要加嗎？據
09/01 02:23, 11F
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09/01 02:23, , 12F
我所知我們實驗室配一抗不會加耶！但都會reuse直到照不
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09/01 02:23, , 13F
太出來
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09/01 02:54, , 14F
NaN3很強的抗菌劑 但也很毒 若加了記得一定要戴手套
09/01 02:54, 14F
推
09/01 04:30, , 15F
case by case 啦。 BSA + NaN3 強的抗體可以一管用到畢業
09/01 04:30, 15F
推
09/01 16:07, , 16F
我認為主要是看抗體，有reuse10次就掛掉的也有1年OK的
09/01 16:07, 16F
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09/01 18:08, , 17F
想請問樓上是冰-20 還是4度呢?
09/01 18:08, 17F
推
09/06 15:10, , 18F
我都冰-20，4度壞很快
09/06 15:10, 18F
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09/06 15:16, , 19F
還有配抗體就不要用牛奶了，用BSA比較穩定延後腐壞時間
09/06 15:16, 19F
推
09/06 16:34, , 20F
F大是用 5%Bsa嗎
09/06 16:34, 20F
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09/06 16:58, , 21F
凍-20都可以用半年了,改用BSA的誘因是什麼？
09/06 16:58, 21F
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09/06 16:58, , 22F
而且配抗體選用BSA或牛奶,不是以哪一種適合reuse在考量
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09/06 17:00, , 23F
主要的考量因素還是WB結果,呈色不好看,能保存久放也沒用
09/06 17:00, 23F
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09/07 14:04, , 24F
當然是以結果考量，如果經費許可原PO又想reuse為什麼
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09/07 14:05, , 25F
不優先選等級比較高的？
09/07 14:05, 25F
推
09/07 14:14, , 26F
是，我是用5% BSA
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09/07 14:17, , 27F
但是我沒加NaN3，這你可以自行決定
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09/07 16:20, , 28F
會用牛奶就是多數抗體在5％BSA的效果都不好,這就是限制了
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09/07 16:29, , 29F
跟等級無關,你應該先釐清有誰願意改變data結果,只為reuse
09/07 16:29, 29F
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09/07 16:32, , 30F
而且如果BSA稀釋的data好看,早就凍在BSA reuse,沒換的必要
09/07 16:32, 30F
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09/07 21:02, , 31F
你講反了;另外原PO也只是在問reuse
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09/18 19:08, , 32F
常保低溫，在4度hy
09/18 19:08, 32F
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09/18 19:10, , 33F
不過價力低的抗體可能難在4度hy
09/18 19:10, 33F
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