[求救] shRNA lentiviral infection的問題
我是依照RANi core的protocol先用293T cell做病毒液(使用TransIT-LT1系統),接著加polybrene和先前製作的病毒液做shRNA knockdown infection到P19 cell。
一開始都長得好好的,因為我想收細胞做western blot確認是否knock down成功,但是我一使用trypsin後,細胞就飄著不貼了(連作為control的shGFP也是)。也有試過直接收原盤的細胞,但不知道是不是因為polybrene的關係,刮細胞的時候整盤稠稠的。
想請問一下有沒有人也遇到同樣的問題,或尋求可能我哪裡出錯了。
ps. 我沒有用puromycin篩選細胞
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