[求救] shRNA lentiviral infection的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (hui)時間9年前 (2016/09/12 11:03), 編輯推噓4(407)
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我是依照RANi core的protocol先用293T cell做病毒液(使用TransIT-LT1系統),接著加polybrene和先前製作的病毒液做shRNA knockdown infection到P19 cell。 一開始都長得好好的,因為我想收細胞做western blot確認是否knock down成功,但是我一使用trypsin後,細胞就飄著不貼了(連作為control的shGFP也是)。也有試過直接收原盤的細胞,但不知道是不是因為polybrene的關係,刮細胞的時候整盤稠稠的。 想請問一下有沒有人也遇到同樣的問題,或尋求可能我哪裡出錯了。 ps. 我沒有用puromycin篩選細胞 ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.113.206.159 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1473649393.A.980.html

09/12 13:03, , 1F
之前做沒有這樣的問題耶.. 你的Polybrene濃度放多少啊
09/12 13:03, 1F

09/12 13:03, , 2F
09/12 13:03, 2F

09/12 17:17, , 3F
我polybrene的濃度放8ug/ml
09/12 17:17, 3F

09/12 17:17, , 4F
那你是直接收原盤的細胞嗎?
09/12 17:17, 4F

09/12 17:25, , 5F
有做過polybrene毒性測試嗎?
09/12 17:25, 5F

09/12 17:45, , 6F
沒有耶!但我在infection隔天換新的medium後到trypsin
09/12 17:45, 6F

09/12 17:45, , 7F
前都還長好好的。這樣可能是polybrene的濃度太高嗎?
09/12 17:45, 7F

09/12 18:28, , 8F
不確定耶..沒遇過這狀況 只是我之前做 RNAi core建議
09/12 18:28, 8F

09/12 18:28, , 9F
做之前先做polybrene毒性測試 網站上也有protocol
09/12 18:28, 9F

09/14 10:30, , 10F
好的!我來做polybrene的毒性測試,謝謝你!
09/14 10:30, 10F

09/30 17:27, , 11F
去問問你家學長看看吧
09/30 17:27, 11F
文章代碼(AID): #1NrXhnc0 (Biotech)
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