[求救] western blot 偵測不到大量表現的蛋白

看板Biotech (生命科學)作者treelove (Jörg)時間8年前 (2016/11/04 23:15)推噓3(3推 0噓 15→)

留言18則, 4人參與討論串1/1

大家好想請問下我用35S-promoter 大量表現一個transcription factor, 在Arabidopsis上建立 transgentic lines,在RNA上用RT-PCR 和q-PCR測是有比wild type大量表現 (從10-50倍都有), 問題出在要用western blot 測protein level時, 一直做不出來 (有放positive control有成功所以操作技術沒問題 ), 目前猜測是量太少,想請問除了用Immunoprecipitation外還有沒有其他方法去偵測? 又,有沒有甚麼方法可以證明這些protein是沒有功能的 (因為phenotype幾乎沒有, 我懷疑這些protein沒被製造出或是可能沒功能) 可以給個關鍵字讓小弟有點頭緒嗎? (因為急著要在2個禮拜內趕出來) 謝謝各位~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.248.180 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1478272547.A.6D1.html

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是transcription factor [1;37m推 tynse71864: 是什麼蛋白 (？) 有可能你送的細胞就是無法協助此蛋 11/05 00:35

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就...在猜為甚麼detect不到的原因, 會不會是protein level出問題XD

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lail

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是transgentic line, 萃取植株中的protein, 有在PVDF上用染protein的顯色劑去確認有protein存在PVDF上 ※ 編輯: treelove (140.112.248.180), 11/05/2016 08:44:41 ※ 編輯: treelove (140.112.248.180), 11/05/2016 08:45:41 ※ 編輯: treelove (140.112.248.180), 11/05/2016 08:48:06

推

lucifer74

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lucifer74

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