[求救] his protein western blotting 相關問題
想請問表現His tag的膜蛋白是否需要純化才能以western blotting的方式偵測到?
我們的實驗在膜蛋白上接有His tag，將其transfect into 293T cell，收細胞以RIPA ly
sis cell，而後lysate直接跑PAGE，再進行western blotting
此外細胞同時還有抽DNA確認transfection成功，抽RNA確認該蛋白mRNA有表現，同時也有
染FA確認該蛋白表現(anti-His)，以上三個實驗結果都確認該蛋白的確有表現
然而我們執行western blotting的結果卻是什麼都無法得到，二抗很明顯都認到背景，在
預期的位置完全沒有東西...
由染色結果來看，此蛋白表現強度還可以不過transfection效率不好，大概僅有5%，因此
想請問是因為transfection效率低導致無法染到，還是His tag蛋白本身就需要先純化才
能進行western blotting?
在此先謝謝各位了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.25.106
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