[求救] 組織免疫螢光染色

看板Biotech (生命科學)作者 (嘆息之門)時間8年前 (2016/11/12 19:38), 8年前編輯推噓4(407)
留言11則, 5人參與, 最新討論串1/1
最近的實驗是將帶有螢光dye 脂類物質打入小鼠,看其組織的吸收, 因為老闆想看是組織中何種細胞吃進了螢光物質,所以進行了免疫螢光染色, 遇到的問題是染色的過程中需要使用 Triton-X 100 打洞,但是 會造成那個 dye 的消失,不打洞的話抗體又染不上去, 不知道各位前輩有沒有一些特別的做法,可以請教一下, 謝謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.162.241.244 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1478950692.A.708.html

11/12 19:52, , 1F
染細胞表面的marker?
11/12 19:52, 1F
補充說明一下,抗體有特定而且不是細胞表面的,所以無法更換 ※ 編輯: darkdoor (1.162.241.244), 11/12/2016 21:18:37

11/12 22:20, , 2F
使用弱一點的 detergent 並降濃度 如 saponin,CHAPS
11/12 22:20, 2F

11/12 22:20, , 3F
fix bfr是 PFA?
11/12 22:20, 3F
是PFA沒錯 ※ 編輯: darkdoor (42.72.252.217), 11/13/2016 17:29:39

11/14 21:08, , 4F
用organic solvent fix?
11/14 21:08, 4F

11/14 21:08, , 5F
啊大概也會把你的dye洗掉
11/14 21:08, 5F

11/14 23:33, , 6F
冷凍切片可試試用-20度C的methanol fix
11/14 23:33, 6F

11/14 23:34, , 7F
這樣可以不用打洞 不過還是得試試看
11/14 23:34, 7F

11/15 09:17, , 8F
organic 之前試 ICC ,油類會全部洗掉噢
11/15 09:17, 8F

11/15 23:18, , 9F
有機溶劑類的,油類很多都會被洗掉呀。不過原PO的狀況中
11/15 23:18, 9F

11/15 23:19, , 10F
如果有切片的話,那個厚度應該會小於一顆細胞厚度。
11/15 23:19, 10F

11/15 23:19, , 11F
所以可以試看看跳過打洞那步。
11/15 23:19, 11F
文章代碼(AID): #1O9lyaS8 (Biotech)
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