[求救] Cytokine dependent細胞株凍存方法 MC/9

看板Biotech (生命科學)作者andy0313 ( )時間8年前 (2016/11/15 08:50)推噓0(0推 0噓 2→)

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大家好小弟在實驗上需要使用MC/9這株細胞(mouse liver mast cell, IL-2 dependent) Medium為 RPMI1640 + 10% FBS + 10% T-STIM + L-Gutamine + 0.05 mM 2-ME 從ATCC購買後第一次解凍就發現ATCC凍管的存活率偏低解後第一天觀察大約只有20%~30% 之後也是有長回來且生長速度正常但是目前又碰到同樣的問題在建立cell bank時發現自己凍存的細胞存活率極低(最高接近10%...很多只有3%以下) 不管使用生長的medium或FBS, DMSO 5%~10%都測試過試是過凍存前一天更換一半左右的新medium 也試過以前ATCC推薦凍存B lymphoblast的方式(凍存液、漸凍盒預先降溫+低溫離心) 但情況...沒有任何的改善因為同時有操作其他一般癌症細胞株凍存與解凍都是正常的所以凍存系統or試劑應該是沒問題才對在凍存前(凍管進漸凍盒)或是解凍當下算過存活率都很正常(80%以上) 但是隔天就是幾乎是全軍覆沒的情況(也試過50%的舊medium) 有耳聞cytokine dependent的細胞很難凍但是目前的情況...實在很難接受麻煩有經驗的大家能夠提供點建議了<(_ _)> 不祈求能有80%存活率...但希望能有ATCC凍管的水準非常感謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 125.227.148.187 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1479171023.A.004.html ※ 編輯: andy0313 (125.227.148.187), 11/15/2016 08:51:59 ※ 編輯: andy0313 (125.227.148.187), 11/15/2016 08:52:59