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[求救] transfection的效率可持續多久？

看板Biotech (生命科學)作者時間8年前 (2016/12/08 14:03), 編輯推噓4(4推 0噓 8→)
留言12則, 6人參與, 最新討論串1/1
用lipofectamin 2000做transfection來over expression gene，第一次是收48hr的6cm dish量的細胞跑WB，效果非常好，無論是293T或是lung cancer cell都很好。 但是第二次做的時候，條件改為48hr的時候將6cm dish culture放大到10cm dish等待長滿後收下protein跑WB，發現完全跟control的表現一樣...完全沒有over expression... 不知道問題出在哪裡... 是不是因為經過一代culture，所以....失效？ QQ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.137.77.59 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1481177034.A.250.html
推
12/08 14:28, , 1F
Transfection送進去的都因為繼代稀釋掉
12/08 14:28, 1F
→
12/08 14:28, , 2F
直接用10cm半滿transfection?
12/08 14:28, 2F
→
12/08 14:46, , 3F
要看你用的細胞還有 vector，以及有沒有做 selection
12/08 14:46, 3F
→
12/08 14:46, , 4F
建議你用一樣的 vector 表現 EGFP，這樣你就可以用螢光
12/08 14:46, 4F
→
12/08 14:47, , 5F
追蹤細胞表現的狀況。
12/08 14:47, 5F
推
12/08 18:56, , 6F
看你描述是transfect 48小時後放大到10cm dish, transie
12/08 18:56, 6F
→
12/08 18:56, , 7F
nt transfect最佳表現是24-48小時, 中間經過一次繼代,
12/08 18:56, 7F
→
12/08 18:56, , 8F
又放兩三天等他長滿, 效力過了沒表現很正常吧
12/08 18:56, 8F
推
12/08 19:16, , 9F
我通常30h就收了 最多48h
12/08 19:16, 9F
→
12/09 11:25, , 10F
RTFM
12/09 11:25, 10F
推
12/22 11:39, , 11F
四到五天都沒問題，看plasmid,看gene 類型,跟dish size
12/22 11:39, 11F
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12/22 11:39, , 12F
無關
12/22 11:39, 12F
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