transfection做法

看板Biotech (生命科學)作者 (wei)時間8年前 (2016/12/18 14:52), 編輯推噓0(0028)
留言28則, 4人參與, 最新討論串1/1
碩一時常使用CaCl2做轉染6well 但現在碩二突然做不出來了 試了十幾次都找不到原因 同樣條件實驗室學弟做就沒問題 想問看看有沒有人也是用磷酸鈣沉澱做轉染 可不可以教我 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.246.204.14 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482043977.A.EC0.html

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reagent跟DNA或細胞都跟學弟的一樣嗎(同一管試劑或同一株
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細胞?)?跟一年級用的細胞一樣嗎?
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是的,細胞都是我種的293,試劑我配的,DNA我抽的,只
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是我我有一格給他做
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我覺得 CaCl2 transfection 真的是一個很神奇的技術,
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我用網路上的方法從來沒做出來,反而改成一個莫名其妙
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的方法後突然就可以了,然而過一陣子後又做不出來,這
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時再換回網路上的方法突然又可以了......
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原來也有同道中人,我現在超崩潰我要趕畢業了RRR
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最後一次用的成功的方法是 DNA/CaCl2 混合,加到 2xHBS
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裡,立刻混合,不用打泡泡,靜置 25 分鐘後均勻的灑在
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養細胞的盤子上,灑完後「不要搖勻培養液」!
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可是有個問題是沒灑到的地方的細胞就幾乎不會成功...
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我不知道打泡泡是什麼,但我是用votex震出旋渦,再滴
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進去
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那我建議你問一下學弟的手法好了,真是太神奇了(我自己還沒
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遇過這種狀況)
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我以前是左手使用1ml 塑膠pippet打泡泡(一直排氣),右手
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用pippetment慢慢滴入另一個溶劑(太久沒做忘記兩種溶液名
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稱,抱歉)
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CaCl2跟2xHBS在一起會產生沈澱,所以我都先把DNA加到2xHBS
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以vortex混合數秒,再慢慢滴入CaCl2,讓沈澱物會比較細小
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混合後靜至1分鐘就直接加入medium,隔天有細小沈澱就算良好
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另外,比較麻煩的習慣是CaCl2總是新配再過濾
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從我失敗開始我學弟都會看我做,老闆也知道,可是還是
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....
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我們也是每次重配
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我家是DNA+cacl2混勻,滴hbs進去
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文章代碼(AID): #1OLZ99x0 (Biotech)
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