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[求救] NIPAM成膠問題

看板Biotech (生命科學)作者 (槿花未開)時間8年前 (2016/12/18 15:09), 8年前編輯推噓11(11推 0噓 32→)
留言43則, 6人參與, 最新討論串1/1
增加第二次失敗未成膠的藥品用量 先提一下，我不是生醫相關科系的，我是機械系QQ 主要是想把這材料拿去應用在其他MEMS部分 可是因為從來沒接觸過這方面的東西，實驗室也沒人懂... 所以不知道該問誰Orz 使用的藥品有N-isopropylacrylamide、APS、NMBA、TEMED 第一次的比例 N-isopropylacrylamide 1200mg→600mg APS 26mg →13mg NMBA 50mg →25mg TEMED 40ul →20ul DI water 20ml →10ml 第一次是有成膠的，但是實在是不記得確切的凝膠時間 這次再做，把所有藥品減半 丙且想試著提高溫度加速凝膠時間 做了兩組對照，一組是室溫的，一組是加熱70度 70度那組因為沒加蓋所以水分蒸發乾掉了 室溫那組...過24小時來看，發現還是液體狀態QQ 另外我爬了一下文，看到好像APS受潮的話會影響效果 可是我第一次做的時候，藥品裡面好像就有結塊了(廠商給我的時候就有了) 當時我沒想太多就直接用了 除了N-isopropylacrylamide存放冰箱之外，其他藥品都是室溫保存放在藥品櫃 廠商給的時候沒有特別說要怎麼存放，我就把他當成其他藥品一樣放室溫了 請問到底是我的藥品有問題還是配方有問題QQ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.115.67.52 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482044946.A.5E9.html
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12/18 19:48, , 1F
拜託有沒有知道的大大幫忙解救我一下QAQ不一定要一樣
12/18 19:48, 1F
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12/18 19:48, , 2F
的藥品，相關成膠資料也好
12/18 19:48, 2F
推
12/18 23:39, , 3F
APS跟TEMED一起加？ 你有先後順序嗎？
12/18 23:39, 3F
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12/19 00:05, , 4F
有，N-isoprpylacrylamide>NMBA>APS>TEMED
12/19 00:05, 4F
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12/19 00:06, , 5F
有先等粉末溶解完之後再加下一個藥品
12/19 00:06, 5F
推
12/19 09:11, , 6F
有mix均勻嗎
12/19 09:11, 6F
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12/19 13:09, , 7F
有搖晃攪拌等粉末看不見再繼續，第一次跟第二次都是用
12/19 13:09, 7F
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12/19 13:09, , 8F
磁石攪拌均勻的，但是第二次的膠到現在都還沒有固化
12/19 13:09, 8F
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12/19 19:51, , 9F
在加APS與TEMED時，用磁石攪拌的時間分別有多久？
12/19 19:51, 9F
APS放進去大概攪拌一兩分鐘的時間，然後再滴TEMED
推
12/19 23:49, , 10F
沒作過這種膠 但SDS-PAGE作很多>< 想說我們都是把APS泡成
12/19 23:49, 10F
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12/19 23:49, , 11F
水溶液(新鮮配或配大量分裝冰-20一次解凍一小管) 作膠時
12/19 23:49, 11F
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12/19 23:49, , 12F
倒數第二個加下去 稍微混勻後加TEMED就趕快注膠 不知你的
12/19 23:49, 12F
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12/19 23:49, , 13F
這種膠這樣處理會不會比較容易凝 給你參考
12/19 23:49, 13F
請問你們APS粉末都是怎麼保存的Q___Q 我們冰箱沒有到-20這麼低溫 APS放一般藥品櫃而已，這樣會壞嗎 APS泡成溶液是用莫耳濃度算嗎？
推
12/19 23:58, , 14F
acrylamide會先跟buffer混好 APS先配成10%的
12/19 23:58, 14F
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12/20 00:00, , 15F
通常加進去稍微混合一下 10分內就凝了
12/20 00:00, 15F
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12/20 00:03, , 16F
這凝膠的速度是不會有等粉末溶解的時間的
12/20 00:03, 16F
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12/20 00:04, , 17F
感覺是錯過凝膠的timing了
12/20 00:04, 17F
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12/20 00:06, , 18F
然後要做較稀的膠 我們只會減少acrylamide的量
12/20 00:06, 18F
因為第一次做的時候也是這樣的，查到這個配方的文獻也是說大概要24小時會凝膠 buffer是交聯劑之類的嗎QAQ？ 還是會不會是交聯劑變質Orz 另外想請問多少的單體要搭配多少的APS溶液 ※ 編輯: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 00:49:02 ※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 01:55:49
推
12/20 08:51, , 19F
APS我們都封parafilm放乾燥箱 為了減少打開次數所以配大量
12/20 08:51, 19F
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12/20 08:51, , 20F
10%水溶液 分裝小管冰-20 冰3個月內應該都還可以用 不要
12/20 08:51, 20F
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12/20 08:51, , 21F
反覆解凍(一般冰箱冷凍庫大概也可以吧。。。)
12/20 08:51, 21F
推
12/20 08:56, , 22F
以前每次作膠前開罐新鮮配APS 大概一年多後膠就凝不起來
12/20 08:56, 22F
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12/20 08:56, , 23F
了(凝膠時間越拖越久) 你新買的APS應該還沒這麼快失效 有
12/20 08:56, 23F
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12/20 08:56, , 24F
些結塊也還正常 通常都買最小包裝的 壞了整罐丟也不心疼
12/20 08:56, 24F
10%水溶液是用什麼算的QAQ重量？莫耳？ 我那時候買上面寫98%，這樣是還要乘0.98嗎Orz ※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 09:08:03
推
12/20 09:24, , 25F
我是1gAPS+10ml水這種算法>< 另外可查SDS-PAGE配方 同樓
12/20 09:24, 25F
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12/20 09:24, , 26F
上提到的 調整膠濃度時不是所有東西都減同樣倍數
12/20 09:24, 26F
好，我再做一批有成功那次的配方試試看，如果沒問體應該就是不能減半QAQ 另外，老師昨天說，現在一直沒有膠化的液體再多加APS跟TEMED，看能不能讓它成膠，這 有可能成功嗎→__→？ ※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 09:47:43
推
12/20 10:22, , 27F
看配方表 好像越低濃度膠的APS跟TEMED要加比較多量ㄟ...
12/20 10:22, 27F
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12/20 10:22, , 28F
我也不知道再加會不會凝你可試試
12/20 10:22, 28F
看來我的表達能力有問題讓大家都誤會了QQ 我所有都有減半(包括水)，我以為這樣子單體的莫耳濃度是沒有變的
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12/20 10:25, , 29F
原來你的減半是只有藥品減半,水體積還是20ml
12/20 10:25, 29F
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12/20 10:26, , 30F
APS,TEMED用量要維持1/1000,不要更動
12/20 10:26, 30F
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12/20 10:29, , 31F
時間過了未成膠的也別用了,失效了
12/20 10:29, 31F
不好意思讓大大誤會了，我水的用量也有改變，上次20ml這次10ml 因為想說要維持原配方的濃度，所以大家一起減半這樣濃度才會一樣 減半的原因是想要做出比較少的膠，因為模具容量沒有20ml這麼多 所以把所有東西減半，想說這樣可以得到一樣濃度10ml的膠 APS跟TEMED的用量1/1000是跟什麼相比@@?水的體積嗎? ※ 編輯: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 11:23:30 ※ 編輯: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 11:27:54
推
12/20 23:00, , 32F
照理說你這樣減半應該要ok呀 也許是攪拌擾動到吧 加油囉
12/20 23:00, 32F
凝膠時不能晃動嗎？ 我好像等待時除非我不在學校，不然沒幾小時就會去晃晃看有沒有固化 該不會是這原因吧OAO ※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 23:36:59
推
12/21 00:06, , 33F
因為SDS-PAGE很快10-30min就凝 加上注入玻璃夾層也不方便
12/21 00:06, 33F
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12/21 00:06, , 34F
搖 所以我們會多配些 剩下的放著 如果剩下的凝了(會搖一下
12/21 00:06, 34F
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12/21 00:06, , 35F
看看) 那膠應該也凝了 沒機會一直搖膠 不知一直搖是否會影
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12/21 00:06, , 36F
響
12/21 00:06, 36F
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12/21 00:31, , 37F
在PAGE中,APS跟TEMED的用量約1/1000是相較於總體積
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12/21 00:31, , 38F
一直去晃動(搖)就不會凝了,所以最前面才問磁石是否攪太久
12/21 00:31, 38F
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12/21 00:33, , 39F
另外以PGAE來看,無封閉(保持空氣暴露)也會比較慢凝成膠
12/21 00:33, 39F
想請問一下，相較於總體積1/1000，是1ml應該有1mg的APS嗎？ 我查網路上SDS-PAGE配方，好像20ml要有0.1ml的10%APS，這樣好像沒有符合1/1000？ 是我算錯還是這兩個是不一樣的不能通用？ 另外想問，APS多加對於膠體聚合成膠會有影響嗎？ 例如太多會不能凝膠之類的 ※ 編輯: lyonalaya (42.73.92.25), 12/21/2016 11:01:52
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12/21 11:59, , 41F
以SDS-PAGE,最常參考的molecluar cloning所提供的比例
12/21 11:59, 41F
推
12/21 17:58, , 42F
APS越多凝越快，用過20%的APS對SDS-PAGE膠體品質沒影
12/21 17:58, 42F
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12/21 17:58, , 43F
響只是凝很快
12/21 17:58, 43F
好，謝謝各位大大的幫助OuO 明天試試看APS泡10%溶液，看能不能順利凝膠 如果還是不能的話搞不好真的試藥品出問題了Orz ※ 編輯: lyonalaya (111.248.4.14), 12/21/2016 21:53:17
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