[求救] 無法從T-vector切下目標基因

看板Biotech (生命科學)作者 (綠子)時間8年前 (2016/12/21 02:00), 編輯推噓1(104)
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各位好 這陣子都在進行酵切要將接於T-vector上的目標基因給切下來 並接到表現載體上,但是直到現在都沒辦法切下來 加入XhoI或NdeI單一切時都能切動 但是當加入另外一個酵素時就會自己黏回去原本的大小 兩種酵素都是最近剛新訂的 目標基因(約900bp) 切位為XhoI及NdeI(NEB) 使用的bf為CutSmart Buffer(NEB) 37度C、1小時、6小時、24小時 因為卡很長很長一段時間了 希望有人能給些建議QQ 非常感謝大家耐心看到這裡(跪) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 218.173.131.121 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482256836.A.5FC.html

12/21 08:12, , 1F
請先確定東西有在T-vector裡,定序或PCR都行
12/21 08:12, 1F

12/21 09:33, , 2F
麻煩秀圖,秀大小
12/21 09:33, 2F

12/22 00:47, , 3F
直接做double digestion試看看如何
12/22 00:47, 3F

01/05 06:17, , 4F
切完一支有先純化後再切下一支嗎?
01/05 06:17, 4F

02/27 09:49, , 5F
enzyne加太多?glycerol濃度太高會導致切不動。
02/27 09:49, 5F
文章代碼(AID): #1OMN74Ny (Biotech)
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