[求救] 想請教BL21(DE3)pLysS這個菌株

看板Biotech (生命科學)作者 (phoebe)時間8年前 (2016/12/26 18:50), 8年前編輯推噓2(2014)
留言16則, 6人參與, 最新討論串1/1
有人有用過嗎? 我想clone一段5600 bp左右的序列到pJET vector,然後轉型到top10擴增 但這段gene好像有toxic sequence,菌都長很差不然就是insert錯誤 試過室溫培養感覺效果沒甚麼改善QQ 所以想試試看別的細菌Strain 查資料看到BL21(DE3)pLysS好像可以耐toxic sequence 用他似乎可行? 然後我不是要做蛋白質表現的,純粹是Clone以後收藏起來 不知道有沒有人有類似經驗的可以提點一下orz,謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.208 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482749443.A.51B.html ※ 編輯: kaofei (140.112.4.208), 12/26/2016 18:51:12

12/26 20:12, , 1F
印象是c41 c43吧?雖然他們主要不是保存質體用的…另
12/26 20:12, 1F

12/26 20:12, , 2F
外想問你的vector是哪個呢?
12/26 20:12, 2F

12/26 20:14, , 3F
阿 沒事 當我沒問 哈哈
12/26 20:14, 3F

12/27 00:47, , 4F
要注意有沒有 recA knockout 否則會重組 promotor
12/27 00:47, 4F

12/27 00:48, , 5F
不建議用BL21(DE3)當insert保存
12/27 00:48, 5F

12/27 06:28, , 6F
top10跟DH10B像,可以用來保存這大小的vector
12/27 06:28, 6F

12/27 06:31, , 7F
而且你的vector可能也沒有可在top10表現的promoter
12/27 06:31, 7F

12/27 06:35, , 8F
sequence很不穩定機率大,而可能不是表現出來有毒
12/27 06:35, 8F
※ 編輯: kaofei (140.112.4.192), 12/27/2016 11:28:07

12/27 11:32, , 9F
回bilingru,為什麼不建議呢?如果有pLyss?還沒很懂這些
12/27 11:32, 9F

12/27 11:32, , 10F
細菌的strain的差異...
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12/27 11:34, , 11F
回blence:會說有毒是看其他paper說的(研究同個virus)
12/27 11:34, 11F

12/27 11:34, , 12F
那想請問如果sequence不穩定,有甚麼方法可以克服嗎?
12/27 11:34, 12F

12/27 19:46, , 13F
看不太懂,你如果只是要收plasmid當然盡量不要進
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12/27 19:47, , 14F
expression strain啊, dh5a, dh10b, xlgold這些先試吧
12/27 19:47, 14F

12/28 06:37, , 15F
保存載體不建議放到表現菌株。請選用I大推薦的載體
12/28 06:37, 15F

12/28 06:37, , 16F
保存菌株來做clone吧
12/28 06:37, 16F
文章代碼(AID): #1OOFO3KR (Biotech)
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