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不同dish下藥後沒效果

看板Biotech (生命科學)作者 (lonelyvenice)時間8年前 (2017/02/27 14:54), 編輯推噓5(5推 0噓 39→)
留言44則, 6人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓， 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我們實驗室本身是在做加藥實驗,一開始以24well篩IC50,seed細胞是30000cell/well 大約是0.5 uM左右,在收western用的cell lysate時候是用6well,細胞按照dish 底面積去換算,量大概是1.5x10^5,用IC50s用IC50濃度去做也有效,但是最近想收10cm dish,seed按照底面積換算大概要9x10^5,但是結果完全沒有死,於是我又降了細胞數在 6x10^5也是沒有明顯效果,請問一下這種情況還要降細胞數嗎??又或是劑量不足 24well 劑量用1ml 6well 劑量用3ml 10 cm 劑量用8ml(一般細胞繼代大概都是8ml長2天們問題) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.128.65.187 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1488178482.A.BCB.html
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02/27 15:10, , 1F
劑量是指除了medium又分別加加了1,3,8 ml的藥進去?
02/27 15:10, 1F
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02/27 16:03, , 2F
我的意思是 medium共1,3,8ml而當中已經包含藥了
02/27 16:03, 2F
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02/27 17:14, , 3F
24 well 用 1 mL？底面積換算這樣 10cm 應該要 29 mL耶
02/27 17:14, 3F
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02/27 17:15, , 4F
嗯!! 知道了 那藥的stock濃度是多少呢
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02/27 17:17, , 5F
加藥的方式是用medium稀釋藥物最後總體積是8ml
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02/27 17:18, , 6F
還是8ml medium再加入藥物進去?
02/27 17:18, 6F
推
02/27 18:02, , 7F
藥是固定濃度配成Medium後 不同面積的dish加不同體積(量)
02/27 18:02, 7F
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02/27 18:02, , 8F
的medium 這樣嗎? 然後細胞數是依照面積等比例放大數量
02/27 18:02, 8F
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02/27 18:02, , 9F
這樣詮釋有對嗎?
02/27 18:02, 9F
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02/27 18:16, , 10F
回tz大 沒錯 就是這樣
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02/27 18:18, , 11F
回a906 stock是10mM 用之前會先取一點出來稀釋成1mM
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02/27 18:21, , 12F
依照目前敘述只能推測是不是藥壞了?
02/27 18:21, 12F
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02/27 19:11, , 13F
確定藥沒有壞喔 因為有嘗試用24WELL重試 沒問題
02/27 19:11, 13F
推
02/27 21:13, , 14F
你放大面積的實驗過程 細胞數1x 5x 30x(or 20x) 藥品濃
02/27 21:13, 14F
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02/27 21:13, , 15F
度相同 體積1 3 8ml 你算實際藥品的量(濃度x體積)出來 就
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02/27 21:13, , 16F
會發現相對細胞數而言 藥品的量越來越不夠 (假設濃度為1
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02/27 21:13, , 17F
則細胞比上藥品量1:1 5:3 30:8) 不知道我這樣想對不對
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02/27 21:13, , 18F
給你參考
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02/27 22:40, , 19F
我的建議同 tz 大
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02/27 23:23, , 20F
樓樓上的說法當然不對阿
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02/27 23:27, , 21F
如果那個解釋合理,那養細胞用的10%FBS,不就也是主要變因?
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02/27 23:41, , 22F
可能管壁會bind藥? 再拿medium跑個hplc/elisa看看藥
02/27 23:41, 22F
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02/27 23:41, , 23F
的濃度有沒跑掉
02/27 23:41, 23F
推
02/27 23:44, , 24F
確定三組用一模一樣的medium/drug mix會得到不一樣的
02/27 23:44, 24F
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02/27 23:44, , 25F
結果? 用同一個batch?
02/27 23:44, 25F
推
02/28 07:29, , 26F
謝謝blence的指正 我腦袋打結想錯了...
02/28 07:29, 26F
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02/28 19:35, , 27F
事實上以我養細胞的經驗，配好的一罐 10% FBS 的培養液
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02/28 19:35, , 28F
同樣 10 cm dish，種相同的細胞相同的數量，用不同體積
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02/28 19:36, , 29F
的培養液下去養，養出來的結果還真的會不太一樣，尤其
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02/28 19:37, , 30F
是細胞數變 30 培養液體積卻只增加 10 倍這樣的狀況...
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02/28 19:38, , 31F
應該是這麼說：你在 24 well 用 1 mL 培養液，到 10 cm
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02/28 19:39, , 32F
dish 上時你細胞數量用底面積去計算倍率，那加的培養液
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02/28 19:40, , 33F
體積也應該要用底面積倍率去計算，不能當純用剛好蓋過
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02/28 19:40, , 34F
細胞的量，不然這也會多產生出一個變因。
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02/28 22:25, , 35F
液面高度影響溶氧量阿,所以medium加越多,反而長得變慢
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03/01 13:01, , 36F
所以10cm dish真的要用大量的medium的意思
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03/01 13:18, , 37F
你可以用大體積試個幾次，如果IC50就正常了那就表示必
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03/01 13:19, , 38F
須用這個體積做，如果你覺得太浪費 medium 就只好從 24
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03/01 13:20, , 39F
well 用比較少的體積重新開始測 IC50。
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另外，我是覺得 24 well 用到 1 mL 有點怪，24 well 建
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03/01 13:21, , 41F
議體積一般是 0.5 mL 左右。
03/01 13:21, 41F
推
03/01 15:43, , 42F
細胞產的代謝物也會因medium˙量不同而有不同濃度呀~要考
03/01 15:43, 42F
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03/01 15:43, , 43F
慮的點太多 原po乾脆用10cm作IC50實驗或收30格24well好了>
03/01 15:43, 43F
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03/01 15:43, , 44F
<(比較可行的可能是多收幾個6well啦~)
03/01 15:43, 44F
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