[求救] MC3T3-E1 骨母細胞貼附問題

看板Biotech (生命科學)作者 (Mirage)時間8年前 (2017/05/03 20:05), 編輯推噓3(3014)
留言17則, 7人參與, 最新討論串1/1
本魯目前剛接觸細胞培養 最近在實驗室養了"MC3T3-E1"這株細胞株 Medium 使用的都是文獻上以及參考中文文獻的配方(基本上都一樣) Flask也是用康寧貼附型細胞專用的(75cm2) 目前遇到一個小瓶頸, 就是利用0.25%的Trypsin-EDTA鏟起細胞, 細胞密度在"七成"時鏟起, 卻只有三成細胞有被鏟起來, 試過用10%Trypsin-EDTA得到一樣的結果 因為細胞算是年輕的細胞, 部分排除細胞老化的可能, 在此跟版上大神們求救><>< 有無能將(活)細胞鏟起至少85%的方法 ----- Sent from JPTT on my HTC_M8x. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.137.98.252 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1493813118.A.769.html

05/03 20:47, , 1F
拍盤
05/03 20:47, 1F

05/03 21:06, , 2F
拍過了,而且不小力
05/03 21:06, 2F

05/03 21:48, , 3F
我用0.05%的trypsin也都還ok 因為是很久以前養過的不太記得
05/03 21:48, 3F

05/03 21:49, , 4F
所需處理的時間 不過應該沒有太難搞所以沒有特別印象
05/03 21:49, 4F

05/03 21:50, , 5F
建議 可以先將飄起的細胞先收起來 再加trypsin作用第2次
05/03 21:50, 5F

05/03 21:51, , 6F
就會很聽話了 不建議硬拍 細胞會"斷手斷腳"
05/03 21:51, 6F

05/03 23:03, , 7F
我都把T75壓上去vortex 對強壯的cell line很好用
05/03 23:03, 7F

05/03 23:34, , 8F
我試試看這些方法QQ
05/03 23:34, 8F

05/06 00:05, , 9F
似乎還是失敗。。QQ
05/06 00:05, 9F

05/06 21:52, , 10F
那你要不要補充一下你的作法 讓大家幫你看看
05/06 21:52, 10F

05/06 22:00, , 11F
或是找前輩看你操作 畢竟隔空抓藥有困難
05/06 22:00, 11F

05/06 22:03, , 12F
trypsin回溫太多次失效了??
05/06 22:03, 12F

05/08 22:23, , 13F
有些難纏的細胞株可以用Trypsin在37度作用個2~5分鐘
05/08 22:23, 13F

05/10 18:56, , 14F
有先wash過再加trypsin嗎?
05/10 18:56, 14F

05/11 14:35, , 15F
PBS wash一次不夠 有沒有wash第二次
05/11 14:35, 15F

05/11 14:36, , 16F
再不行就直接上細胞刮勺
05/11 14:36, 16F

05/20 22:05, , 17F
非常感謝以上諸位的幫忙>< 目前已經成功了 謝謝=D
05/20 22:05, 17F
文章代碼(AID): #1P2ST-Tf (Biotech)
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