[方法] DNA purification(~30kb)
大家好，前情提要如下：
我用T4 ligase黏了一段大概近30kb的dsDNA
之後要做in vitro transcription
理論上我應該要跑膠切膠純化...= =
但這個步驟感覺會lose很多 (看到比較適合的是Zymo的，約50-70%大片段回收率)
所以我就只純化接著往後做看看
所以我想問的是
我看qiagen blood & tissue他們elute最主要的就是約30kb的DNA
但第一次離心前我應該要有個DNA binding的動作
blood & tissue裡沒有
我想到的作法是：
1. ligation 200+ 加酒精 200跟buffer AL 200 離心然後之後AW1、AW2...
2. ligation 100+ mini裡的PB binding buffer 500，離心，然後AW1、AW2...
3. Isopropanol沉澱法
但我不是很熟要怎麼調整鹽類的濃度...有人可以指點我一下嗎orz
不知道有沒有人這樣modify過或類似經驗可以分享看看
謝謝>"<
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