[求救] 脂肪酸如何溶解在培養液???

看板Biotech (生命科學)作者 (sammilololo)時間8年前 (2017/06/10 11:30), 編輯推噓4(4022)
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大家好, 目前我正在做細胞實驗 實驗的內容是要用"加了脂肪酸的培養液"養細胞 我們所用的脂肪酸有oleic acid(OA)和palmitic acid(PA) OA的部分還好,在medium的溶解度ok 問題是在palmitic acid 我們是先用與PA相同濃度的NaOH當作solvent來溶解PA 在這個步驟PA都能夠完全溶解在內 而因為是要餵細胞吃,所以在配置成working solution之前 要先把PA和 BSA conjugate在一起,以模擬在生物體內uptake脂肪酸的形情 但問題來了 這個BSA一開始也是要溶在medium裡面 而PA一旦碰到medium就立馬析出 怎麼弄都弄不散也溶不了 我也找了很多的reference 有人說可以用DMSO 但是我的實驗剛好不能用DMSO...... 然後因為我已經盡力去溶解它了 medium還是呈現混濁狀 我不知道他的極限是不是就只能這樣了?? 因此想請問板上的各位 你們有遇過類似的實驗嗎????你們都是怎麼解決的呢???? 真的很想趕快解決這個問題啊~~~~不然細胞都不能養TT 謝謝各位~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.247.232.108 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1497065405.A.718.html

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不能用DMSO的原因是什麼呢?
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因為我的實驗室要看發炎激素的變化
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之前有聽學長說DMSO會抗發炎(?) 不曉得有沒有聽錯
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所以擔心會影響我的實驗結果
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還是其實影響沒那麼大呢
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PA的最終濃度多高是重點。會在media裡析出的話,0.1%的dmso
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其實也沒有任何幫助。我的經驗是你要讓PA跟BSA慢慢地conju-
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gate,最好能放在55度的水浴兩小時(in NaOH solution)。但
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然後跟media混合時,要慢慢一滴滴地滴下去同時搖晃混勻。即
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使如此,因為PA水溶性真的不好,不太可能用到高於1 mM的濃
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我conjugate時的PA濃度是2mM 所以是要先降低PA的初始
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濃度嗎? 我最終要使用的濃度是500uM就好 所以是一開
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conjugate時的濃度可以更高,因為是在鹼性溶液裡,溫度夠高
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的話其實溶得很好,500 uM的話我覺得要做到澄清(只有一點點
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濁)是完全可以的。BTW你BSA最終濃度是1%嗎?
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了解!謝謝你 那請問最後的working solution
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我BSA和 PA的濃度是1:6
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是需要最後把BSA調到1%嗎?
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不好意思 可能回的慢 我還不太會用ptt的介面QQ
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imgur.com/b4GfTe7
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圖片上的已經是woring solution了 這樣算清澈嗎?
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看起來可以再澄清一點,我有寄站內信給你了
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我回信了唷~ 謝謝你!!
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曾經遇過一樣的問題 XD
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最後是把 FBS拿掉就解決了
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文章代碼(AID): #1PEsUzSO (Biotech)
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