[求救] 請問collagen的western用UREA會比較好嗎?

看板Biotech (生命科學)作者 (NEET)時間8年前 (2017/06/27 14:57), 編輯推噓2(209)
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我用一般的RIPA跑collagen,雖然也能跑,但效果不好,要loading很多,RIPA廠商給的配方如下。 0.5M Tris-HCl, pH 7.4, 1.5M NaCl, 2.5% deoxycholic acid, 10% NP-40, 10mM EDTA 後來我用UREA,GAPDH差不多,但UREA的collagen明顯多很多,但是用UREA問題是離心後很容易有鼻涕, BCA定量也要注意干擾。加上我也要跑其他蛋白,有些protocol有提到用酸溶的不曉得會不會影響其他 蛋白。 請問一般如果同時要跑collagen和其他蛋白的western,有特別建議用UREA或甚麼成分的lysis buffer嗎? 如果真的要用UREA,那個鼻涕是染色體嗎 ?要如何去除那個黏黏的鼻涕狀沉澱? -- 當你選了一間新餐廳,發現沒想像中的好吃的時候,你下次願意去吃另一間食安有問題的, 當作給新餐廳老闆的一點抗議嗎? 當你發現新買的飲料不好喝,你下次願意去喝化糞池的水,當作表示對飲料商的不滿嗎? 當你宿舍舍友管機歪又囉嗦,你願意搬去和強暴犯住一起,表達對原本舍友的不滿嗎? 當你發現小孩還不會講話,只會哭很煩,你會選擇把這個小孩丟到孤兒院,再生一個看會不會安靜點嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.137.77 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1498546648.A.740.html

06/27 16:05, , 1F
benzonase
06/27 16:05, 1F

06/27 16:09, , 2F
在UREA內不會死掉嗎?
06/27 16:09, 2F

06/27 19:01, , 3F
enzyme不會被UREA或 detergent給破壞嗎?還是要哪時候加?
06/27 19:01, 3F

06/27 19:22, , 4F
你可以細胞多收一點,取一部分出來用Urea粹,其他用
06/27 19:22, 4F

06/27 19:22, , 5F
平時的方法即可
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06/28 04:09, , 6F
可以用sonicator來破壞DNA
06/28 04:09, 6F

06/28 23:32, , 7F
有人知道臺大醫院有哪個共研有sonicator嗎?
06/28 23:32, 7F

06/30 01:02, , 8F
6共試試?
06/30 01:02, 8F

06/30 06:27, , 9F
加loading dye後煮久一點再離心看看
06/30 06:27, 9F

07/05 00:02, , 10F
疏水性蛋白有些不是不建議煮嗎?collagen有沒有這種限制?
07/05 00:02, 10F

07/05 00:03, , 11F
@tynse71864:感謝,我明天去問
07/05 00:03, 11F
文章代碼(AID): #1PKW7OT0 (Biotech)
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