[求救] PCR marker沒跑出來

看板Biotech (生命科學)作者 (~讓我考上吧~)時間8年前 (2017/08/04 20:23), 編輯推噓9(9027)
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如題,我是用波牌 100bp DNA marker跟6X loading buffer,比例sample5:buffer 1,但照膠時marker沒出來就更別說有其他band了,UV照膠也都有設定,而且已經試兩次 都ㄧ樣,這是發生什麼事嘛? 再者pcr機器會有可能影響批不出東西的原因嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.34.144.193 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1501849392.A.5BF.html

08/04 21:42, , 1F
PCR機器當然不會影響UV照膠時marker沒出來
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08/04 21:46, , 2F
我是想問機器是否會影響無產物的情況呢?不好意思沒
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08/04 21:46, , 3F
講仔細。
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配膠有加dye嗎?
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一班來說沒有MARKER99%是膠沒做好,EtBr OR DNA染劑
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有加?
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先猜沒加染劑
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電極插反 旁邊load個1kb的看看
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PCR批不出來的原因太多太多了 膠照不出來的倒是沒幾
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我猜膠是用水配的
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但是都不是耶!電極也很肯定沒插反,也有加dye!膠
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也是用TBE配的,我用這組marker跟loading dye已經跑
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第二次都是ㄧ樣空無ㄧ物了……
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而且我是內染的
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確定電源供應器有啟動?如果是EtBr內染你照膠的時候
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膠下面1/3左右應該會有一條界線 有嗎?
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08/06 00:52, , 18F
dye有跑出來嗎?有的話內染的EtBr或是DNA染劑微波完有等
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膠稍微冷才加嗎?我遇到通常都是太急著加但是溫度還太高
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所以degrade
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內染不行就改一下外染 然後跑個plasmid當control
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08/06 14:47, , 22F
跟其他實驗室借已包含loading buffer的marker
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08/06 20:25, , 23F
給個照片 ,比較好討論
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08/07 12:58, , 24F
建議補個圖片比較容易判斷 一般marker沒出來90%是膠沒做好
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08/07 19:20, , 25F
謝謝大家,我已知道原因了,但都不是大家猜想的哦!
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08/07 20:43, , 26F
那請問是什麼因素呢?
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08/07 23:40, , 27F
UV波長不一樣嗎?
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08/08 09:43, , 28F
我猜沒開UV光 XDDD
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08/08 19:27, , 29F
是我們家不用etbr染計,而是用無毒染計可兼loading
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dye用,但新買marker附的dye要外染,所以我很順手
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的拿來用了,結果就GG
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08/08 19:28, , 32F
發現劑打錯,歹勢
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08/09 00:51, , 33F
意思是原本的無毒染劑染不到新買的marker? 要專用的?
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08/09 00:59, , 34F
他marker裡面已經有dye了就沒另外再加內染的loading b
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uffer
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PCR又剛好沒跑出東西
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文章代碼(AID): #1PX6SmM_ (Biotech)
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