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[求救] 細胞汙染解決

看板Biotech (生命科學)作者 (BIRD <(O)3)時間8年前 (2017/08/13 18:11), 8年前編輯推噓15(15推 0噓 20→)
留言35則, 17人參與, 最新討論串1/1
as title 目前實驗室的細胞實驗 斷斷續續污染了快兩三個月 雖然前一陣子有比較緩解 但最近又開始有災情出現 先說汙染類型 用肉眼看明顯可以看到 medium變成粉紅色 然後裡面有白色的沙沙狀的東西 如果用高倍顯微鏡(x40)可以看到小小的黑點點在動 之前實驗室已經有用過的解決方法 1.laminar flow裡面所有的東西都用酒精跟抗菌劑擦過然後照UV(hipa半年前才換過) 2.incubator也全部用酒精跟抗菌劑擦拭在照UV,並且把hipa換掉 ---------猜測------------ 之前查到有些人說這種汙染是在小牛血清裡面可能會有的東西 不過我們的血清是跟GIBCO購買的高級血清照理來講應該不會出問題 另外PBS因為都是在配完滅菌後就會把它放到laminar flow裡面照UV然後再使用 而且也會先檢查有沒有懸浮物才會使用 TE都是跟廠商買來自行加入滅過菌的PBS所以機會不高 其實常常困擾的問題是同一批分的細胞 有一盤有另一盤卻沒有orz 我自己認為的部分可能是 1.滅菌鍋爐的效益變差,因此可能血清瓶滅菌不完全 不知道現在有哪些方法可以測試滅菌爐的效果?? 2.在laminar flow同一間房間有養幾隻實驗鼠 不知道會不會是跟這些老鼠有關? 寫了好多感謝耐心看完的大大 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.100.192 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1502619118.A.B17.html
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08/13 19:19, , 1F
每個人操作都會嗎?
08/13 19:19, 1F
每個人都有,只是沒遇過同一天一起爆發的,通常都是今天是A明天是B
推
08/13 19:42, , 2F
滅菌釜可以跟廠商或醫材行買滅菌指示劑；還有我一直很懷疑
08/13 19:42, 2F
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08/13 19:42, , 3F
把器具曬在操作台的UV真的有很好的殺菌效果嗎，畢竟照射死
08/13 19:42, 3F
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08/13 19:42, , 4F
角很多
08/13 19:42, 4F
大大是說滅菌膠帶嗎??就是如果滅菌時有達到標準就會有黑色痕跡出現那個??
推
08/13 20:58, , 5F
實驗鼠......
08/13 20:58, 5F
※ 編輯: andy44 (140.114.100.192), 08/13/2017 21:17:31
推
08/13 21:29, , 6F
滅菌指示劑好像是指一種桿菌的芽孢 市面上好像有賣~
08/13 21:29, 6F
恩恩了解我會去問問
推
08/13 23:29, , 7F
Water bath 有清嗎
08/13 23:29, 7F
water bath 其實滿髒的所以後來都沒人warmXDD
推
08/13 23:54, , 8F
感覺是黴菌/酵母菌類 但是 通常動物不會跟細胞放一起
08/13 23:54, 8F
OK了解
推
08/14 00:37, , 9F
滅菌膠帶不是正式的指示標的，不要相信
08/14 00:37, 9F
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08/14 00:38, , 10F
材料懷疑的話拿去培養測看看就對了，不過大多數時
08/14 00:38, 10F
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08/14 00:38, , 11F
候都是操作的問題比較多
08/14 00:38, 11F
測污染這件事我們都會做 之前是發生剛配完的medium 就會有污染 所以要用前都會測過 不過最近是 一開始沒汙染 可是用了一兩個禮拜 就有汙染產生... 染後側medium裡面就有汙染了... 操作問題好像真的無解 不然就是每個人在操作的時候旁邊都要有人在盯可能會出錯的地方 感覺就像全部打掉重練
推
08/14 01:07, , 12F
黴菌/酵母菌很大顆應該很好認吧？小黑點我還是懷疑細菌。
08/14 01:07, 12F
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08/14 01:07, , 13F
之前實驗室鬼打牆，我最後直接去別的實驗室幹一整套的耗材，
08/14 01:07, 13F
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08/14 01:08, , 14F
從medium到pipet到dish，全都用別人的，慢慢抓原因。
08/14 01:08, 14F
恩亨了解,跟別的實驗室借器材來用好像還沒試過 感謝大大的建議
推
08/14 10:01, , 15F
pipet是不是很久沒有拆開來清洗消毒？ 然後是不是
08/14 10:01, 15F
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08/14 10:01, , 16F
很多時候會不小心沖上去？
08/14 10:01, 16F
pipet好像真的重來沒有清過LOL 再看看要怎麼清 感謝大大建議
推
08/14 10:23, , 17F
液體滅菌有拉長時間嗎？ 1L要滅45分鐘
08/14 10:23, 17F
這我可能要問問學長 不過我自己滅都是40分鐘,那我之後再拉長好了
推
08/17 00:47, , 18F
放個6well 放medium 其中一格滴幾滴滅菌pbs
08/17 00:47, 18F
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08/17 00:48, , 19F
或其他懷疑汙染液體
08/17 00:48, 19F
推
08/17 05:35, , 20F
有圖片嗎？
08/17 05:35, 20F
http://imgur.com/8dgJ5wv
http://imgur.com/my65KST
照片超不清楚sorry但是可以看出最上面那盤明顯跟下面的顏色差別 在視野下就是有非常小非常小的黑色點點在游動
推
08/17 07:01, , 21F
遇過跟你一模一樣的情況，後來發現實驗室隊友很雷，他一做
08/17 07:01, 21F
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08/17 07:02, , 22F
實驗就大污染。每次有污染我都拿Lysol把所有可能的地方擦
08/17 07:02, 22F
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08/17 07:04, , 23F
過一遍，能夠滅的就拿去滅。如果你懷疑medium或FBS，直接
08/17 07:04, 23F
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08/17 07:05, , 24F
分裝一些放在桌上，變混濁就中獎了。
08/17 07:05, 24F
這種情況真尷尬 我也會懷疑某些同實驗室很雷的人 可是也沒辦法叫他不要做實驗 逼他自己用自己的incubator跟laminar flow.... ※ 編輯: andy44 (140.114.100.192), 08/18/2017 11:31:33
推
08/18 11:41, , 25F
打掉重練不會比較慢喔,大家有共識的話互相監督很好
08/18 11:41, 25F
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08/18 11:42, , 26F
雷人就是欠電,請學長去電,然後盯著他做實驗
08/18 11:42, 26F
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08/18 11:43, , 27F
多找一些人花點時間培訓實驗室人員技術可省不少時間
08/18 11:43, 27F
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08/18 11:43, , 28F
medium有汙染幾乎就是操作有問題了XD
08/18 11:43, 28F
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08/22 08:58, , 29F
滅菌膠帶應該只是，滅菌指示的一種，可以買高級一點的
08/22 08:58, 29F
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08/22 08:58, , 30F
測試，GMP廠都會用那個做驗證
08/22 08:58, 30F
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09/03 18:33, , 31F
生物指示劑，裡面是嗜熱芽孢桿菌之類的孢子；請廠商提供適
09/03 18:33, 31F
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09/03 18:33, , 32F
用濕熱或乾熱滅菌的指示劑。
09/03 18:33, 32F
推
09/11 16:52, , 33F
操作台的uv很弱而且穿透力差...
09/11 16:52, 33F
推
10/03 18:54, , 34F
目前市面有檢測滅菌釜功效性的QC實驗唷！可以去買來試
10/03 18:54, 34F
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10/03 18:54, , 35F
試。
10/03 18:54, 35F
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