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[求救] 請問HEK-293細胞做免疫螢光步驟

看板Biotech (生命科學)作者 (boulevard)時間7年前 (2018/01/25 03:44), 編輯推噓1(1推 0噓 8→)
留言9則, 5人參與, 7年前最新討論串1/1
不好意思，對於這方面我還是新手，笨問題請大家鞭小力點 最近養了HEK-293細胞有HER2 express的，想要用已標上量子點的抗體做免疫螢光 第一次做實驗是用活細胞做的，效果真的很不好，細胞常常飄上來 想問一下如果做fixation有沒有甚麼要注意的，我看有人推薦用poly-lysine做coating 這是必要的嗎?還是一般protocol就好? 另外因為HER2是表現在membrane上我需要再permeabilization嗎? 謝謝大家的幫忙~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 193.55.29.169 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1516823082.A.990.html
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01/25 04:41, 7年前 , 1F
HEK293非常不貼,用coating會最好
01/25 04:41, 1F
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01/25 08:17, 7年前 , 2F
不用打洞，抗體選的好很容易觀察，Qdot的話
01/25 08:17, 2F
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01/25 16:51, 7年前 , 3F
謝謝幫忙，我會再試看看
01/25 16:51, 3F
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01/25 19:12, 7年前 , 4F
如果抗體辨認的序列是在 HER2 膜外的部分就不用打洞，
01/25 19:12, 4F
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01/25 19:12, 7年前 , 5F
如果是認細胞內的部分就還是要打洞
01/25 19:12, 5F
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01/25 21:58, 7年前 , 6F
請問如果用cool methnol可以固定嗎?
01/25 21:58, 6F
推
01/26 13:18, 7年前 , 7F
HEK293使用polylysine是必需的,而且效果會好很多
01/26 13:18, 7F
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01/26 13:20, 7年前 , 8F
一般還是建議先用paraformaldehyde固定,型態會較好
01/26 13:20, 8F
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01/26 13:20, 7年前 , 9F
除非你做不出來,再考慮是不是用甲醇等試劑
01/26 13:20, 9F
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