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[求救] flow cytometry分析細胞凋亡問題

看板Biotech (生命科學)作者 (逐夢彗星)時間7年前 (2018/02/02 20:12), 編輯推噓10(10推 0噓 17→)
留言27則, 3人參與, 7年前最新討論串1/1
小弟之前做別的細胞染Annexin V和PI上flow都很正常，但是最近用HepG2做實驗，結果每次跑出來光是control就死了一堆，四象限中除了本來正常的那群細胞外都會多一坨在左上方，如下圖 https://i.imgur.com/wqXqHQZ.png
由於自己操作的經驗以及爬文有很多人都說到這個細胞很黏，因此我在上機前收集活細胞的階段試過本來濃度的TE(小弟平時都用2倍，作用3分鐘)也試過5倍TE作用1分鐘來將細胞打下來，並且將處理時間控制在半小時內，但是結果並沒有差異太大，請問各位對於flow操作以及養過HepG2的大大，我該怎麼辦才能不會出現左上那坨死細胞? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 125.224.97.246 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1517573578.A.410.html
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02/07 11:49, 7年前 , 1F
我覺得這坨染pi的不是死細胞，應該只是沒打散黏在一
02/07 11:49, 1F
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02/07 11:49, 7年前 , 2F
起,建議FS-SS那張圖去框出單細胞的群,再把這群做fl1
02/07 11:49, 2F
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02/07 11:49, 7年前 , 3F
fl3的分析
02/07 11:49, 3F
推
02/07 11:51, 7年前 , 4F
如果會做cell cycle的flow,補個sub-G1更可以驗證你
02/07 11:51, 4F
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02/07 11:51, 7年前 , 5F
凋亡的結果
02/07 11:51, 5F
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02/08 17:57, 7年前 , 6F
可是我是已經過篩了才上機的，這樣也會有沒打散的細
02/08 17:57, 6F
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02/08 17:57, 7年前 , 7F
胞嗎？
02/08 17:57, 7F
推
02/09 11:00, 7年前 , 8F
有做starvation嗎
02/09 11:00, 8F
推
02/09 11:01, 7年前 , 9F
再來，你的cell cycle 圖可以借看一下嗎
02/09 11:01, 9F
推
02/09 11:04, 7年前 , 10F
你的annexin v顏色有選過？
02/09 11:04, 10F
推
02/09 11:06, 7年前 , 11F
說錯，以往看Pi記得是用FL2..
02/09 11:06, 11F
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02/09 11:07, 7年前 , 12F
圖中只可以解釋，你細胞品質可能有問題
02/09 11:07, 12F
推
02/09 11:09, 7年前 , 13F
可能你打細胞手法要更溫和一點
02/09 11:09, 13F
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02/09 11:10, 7年前 , 14F
細胞滿度多少？ HepG2 記得長蠻快的
02/09 11:10, 14F
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02/09 11:12, 7年前 , 15F
通常會用大盤養別太密集 以免抑制生長
02/09 11:12, 15F
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02/09 17:10, 7年前 , 16F
我沒有做過cell cycle耶，所以可以試試看是嗎？還有
02/09 17:10, 16F
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02/09 17:10, 7年前 , 17F
我用六公分種10^6個細胞做48 h看起來大概也只有七八
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02/09 17:10, 7年前 , 18F
分滿而已
02/09 17:10, 18F
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02/09 17:11, 7年前 , 19F
用FL2或FL3會有差嗎？我之前實驗室學姐教我的時候就
02/09 17:11, 19F
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02/09 17:11, 7年前 , 20F
是都設定FL3，做其他細胞也很ok
02/09 17:11, 20F
推
02/15 00:10, 7年前 , 21F
通常建議做fl3, fl2容易受AnexinV影響,但是cell cycl
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02/15 00:10, 7年前 , 22F
e可以試fl2
02/15 00:10, 22F
推
02/22 18:25, 7年前 , 23F
要調螢光補償
02/22 18:25, 23F
推
02/22 18:28, 7年前 , 24F
單獨開一個PI channel 去看PI上去的程度
02/22 18:28, 24F
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02/22 18:29, 7年前 , 25F
FL幾主要是看你螢光物波段
02/22 18:29, 25F
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02/22 18:30, 7年前 , 26F
annexin V也可以是別的色
02/22 18:30, 26F
推
02/22 18:31, 7年前 , 27F
你可能要測一下細胞週期喔，不然狀態好壞會不太準
02/22 18:31, 27F
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