PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] 切膠純化後還是有雜band

看板Biotech (生命科學)作者 (食戟)時間6年前 (2018/07/15 14:54), 編輯推噓2(2推 0噓 6→)
留言8則, 5人參與, 6年前最新討論串1/1
大家好 現在我在用pfu pcr擴增一個片段。用的酵素是Agilent的PfuUltra II Fusion HotStart DNA Polymerase；template是之前建構好的plasmid，每一次下的濃度約700ng/ul；prime r長度是60mer(之前是拿來建構plasmid用的，所以有點長)。pcr後跑膠除了主要band(137 8bp)外，在2.5～3k的地方出現了不明顯的雜band，之後切膠純化主要band後再跑膠確認 還是有雜band。 為了除去雜band，我試著把pcr annealing溫度提高、extension秒數縮短讓它最大只能做 到2k，但都不行。 也有把水當template來跑跑看，結果是什麼band都沒有。 想請問各位這是發生什麼事了？有沒有方法能除去雜band呢？ 感謝各位 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.121.155.195 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1531637652.A.D62.html
→
07/16 07:10, 6年前 , 1F
700ng/ul,做出來的PCR產物應該也沒這麼多
07/16 07:10, 1F
→
07/17 00:49, 6年前 , 2F
重做primer 要過膠純化
07/17 00:49, 2F
→
07/17 05:05, 6年前 , 3F
我猜那個雜band是你的template
07/17 05:05, 3F
推
07/18 21:33, 6年前 , 4F
template是之 前建構好的plasmid為何要用到700ng/ul? 我
07/18 21:33, 4F
→
07/18 21:33, 6年前 , 5F
整個反應都只加10ng 另外primer建議重新設計長度在20-23 n
07/18 21:33, 5F
→
07/18 21:33, 6年前 , 6F
t即可
07/18 21:33, 6F
推
08/14 20:06, 6年前 , 7F
切膠完之後再跑膠又在2.5-3kb出現一模一樣的雜band?
08/14 20:06, 7F
→
08/14 20:07, 6年前 , 8F
會不會是你產物的2或3級結構？
08/14 20:07, 8F
‣ 更多 shokugeki 的文章
文章代碼(AID): #1RIk-KrY (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 shokugeki 的文章
文章代碼(AID): #1RIk-KrY (Biotech)