[求救] casein solution 配法

看板Biotech (生命科學)作者caki ( 搖貝 !!! )時間6年前 (2018/08/31 00:02)推噓0(0推 0噓 0→)

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最近要分離 mouse 的腹腔內的neutrophils 是完全參照current protocol : isolation of mouse neutrophils 的步驟進行 casein soulution 的配製將9 g casein 分次(因casein 難溶解故須分次加入) 加入 80℃ 100 ml. PBS (含 Ca / Mg) 待casein 加完溶解完後使 PBS 沸騰 (boiling) 後 autoclaved 125℃ 1h 過程敘述及結果: casein 真的很難溶解加熱攪拌只是呈現混濁狀乳白色液體第一次配不小心配到一半 PBS 沸騰整個粉糊狀的casein 變成膏狀重新再配一次攪拌了一個小時停止攪拌後下半部還是可以看到粉狀物質拿去autocleaved 後底部呈現淡粉色膏狀上半部則是澄清液體問題 1. 請問哪裡步驟有問題? 2. 看一些國外論壇 a. casein 濃度沒有到這麼高 b. 好像比較多是配在water中 c. 也有提到 casein 難溶所以通常會加 NaOH d. 有看到別人提出相似的步驟及結果(粉色膏狀) 但沒有後續討論用water配與用PBS 配其滲透壓不同打進小鼠腹腔會不會有影響用NaOH 使溶液偏鹼需要再用HCl 滴定至中性嗎但滴定至偏中性 casein不會再析出(?)嗎? 也有看到有人說不能讓液體沸騰這樣要如何滅菌@@ 最後請問 casein solution 到底要如何配製先謝謝大家了 ps. 手機打字排版醜請見諒 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.52.69.2 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1535644959.A.92B.html