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[求救] 請問western跑純化 chimera protein

看板Biotech (生命科學)作者 (心好痛)時間6年前 (2018/10/26 18:54), 編輯推噓4(4推 0噓 14→)
留言18則, 7人參與, 6年前最新討論串1/1
舉例實驗跑純化的AB chimera protein，為確認protein位置有放control，分別是 A protein和AB chimera protein，但在lane(AB chimera protein)上有跑出一個 A protein 的band和AB chimera protein的band，想知道為什麼。 大家有跑SDS-PAGE先配好膠放冰箱冰overnight後膠跑得比較漂亮的經驗嗎? 大家對這有沒有任何邏輯想法 --
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03/24 23:15,
糟糕 硬的是拳頭
03/24 23:15
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03/24 23:32,
濕的是眼眶
03/24 23:32
推
03/24 23:52,
乾的是輸精管
03/24 23:52
推
03/24 23:56,
軟的是樓下小牙籤
03/24 23:56
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03/24 23:57,
大家好我是軟今天
03/24 23:57
-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.216.62.62 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1540551269.A.682.html
推
10/26 20:28, 6年前 , 1F
習慣SDS-PAGE 現配現跑 ；Native冰overnight 先pre-ru
10/26 20:28, 1F
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10/26 20:28, 6年前 , 2F
n一段再load sample 跑
10/26 20:28, 2F
推
10/26 20:33, 6年前 , 3F
然後可能就AB control protein 不純
10/26 20:33, 3F
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10/26 20:33, 6年前 , 4F
先前純化拿時有在跑SEC 確定是單一蛋白嗎
10/26 20:33, 4F
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10/26 22:30, 6年前 , 5F
兩個protein的activity是什麼?
10/26 22:30, 5F
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10/26 22:48, 6年前 , 6F
前面的問題需要知道你的蛋白質怎麼純化的，以及你的
10/26 22:48, 6F
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10/26 22:48, 6年前 , 7F
western 是用什麼樣的抗體。
10/26 22:48, 7F
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10/26 22:49, 6年前 , 8F
後面的問題，有一個可能，據說就算 PAGE 已經凝固，其
10/26 22:49, 8F
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10/26 22:49, 6年前 , 9F
時分子層面上也還沒有完全 polymerized，放個 o/n 之後
10/26 22:49, 9F
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10/26 22:50, 6年前 , 10F
可能因為 PAGE 已經完全 polymerized 所以跑比較好看
10/26 22:50, 10F
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10/26 22:50, 6年前 , 11F
純粹猜測
10/26 22:50, 11F
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10/27 00:17, 6年前 , 12F
IL21R Fc
10/27 00:17, 12F
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10/27 09:09, 6年前 , 13F
感覺是Fc掉下來了
10/27 09:09, 13F
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10/27 18:10, 6年前 , 14F
我也覺得可能是 Fc 掉下來了
10/27 18:10, 14F
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10/27 18:37, 6年前 , 15F
有必要就過個gel filtration吧 探究原因不一定有幫助
10/27 18:37, 15F
推
10/27 20:18, 6年前 , 16F
gel 會丟一個晚上/ 但趕時間就丟一小時 RT
10/27 20:18, 16F
推
12/29 01:28, 6年前 , 17F
冰overnight都蠻好看的 但我是做好了整片膠隔天直
12/29 01:28, 17F
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12/29 01:28, 6年前 , 18F
接嘍蛋白 不知道你的配好了是指膠體還是只是液體
12/29 01:28, 18F
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