[求救] ClaI digestion 怎麼樣就是切不動!

看板Biotech (生命科學)作者 (賊賊)時間6年前 (2018/11/09 11:27), 編輯推噓4(405)
留言9則, 8人參與, 6年前最新討論串1/1
這大概是我cloning以來 遇見最詭異的事了 我要用 Cla I 切我的 plasmid https://www.neb.com/products/r0197-clai#Product%20Information 但他是dam sensitve的enzyme 所以我有transform到GM21635 strain中(dam-/dcm-) http://si.secda.info/yb_md/?page_id=1380 還特地拿去sequence 是有ClaI的cutting site序列的 *還一度懷疑是不是enzyme的問題 但後續有跟廠商要postive control 但最後確定enzyme是有活性的 跪求解 是不是我還有什麼地方沒有注意到? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.246.71.56 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1541734022.A.EEC.html

11/09 15:32, 6年前 , 1F
能否詳細敘述你做的實驗細節? 不然無法幫你判斷
11/09 15:32, 1F

11/09 17:29, 6年前 , 2F
ClaI不是設計用在cloning的,你是因為map不適合再自己找的?
11/09 17:29, 2F

11/10 02:01, 6年前 , 3F
你有看neb的note嗎
11/10 02:01, 3F

11/10 04:25, 6年前 , 4F
有遇過ClaI一直切不動的情況 不確定是methylation還是其他
11/10 04:25, 4F

11/10 04:25, 6年前 , 5F
因素 建議改用別的限制酶切位
11/10 04:25, 5F

11/10 09:09, 6年前 , 6F
遇到跟樓上一樣的情況
11/10 09:09, 6F

11/11 03:58, 6年前 , 7F
其他切位切得動嗎?
11/11 03:58, 7F

11/12 19:36, 6年前 , 8F
你有幾個切位?band應該要多大?
11/12 19:36, 8F

11/19 09:08, 6年前 , 9F
先找另一個Dam敏感的RE測試是否真的是Dam- cell
11/19 09:08, 9F
文章代碼(AID): #1RvFw6xi (Biotech)
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