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[求救] 小鼠腦冷凍切片

看板Biotech (生命科學)作者 (*^o^*)時間5年前 (2019/06/07 10:01), 5年前編輯推噓5(5推 0噓 12→)
留言17則, 3人參與, 5年前最新討論串1/1
嘗試幾次小鼠腦冷切都出現大量的*小洞* 不知問題到底出在哪 想請大家幫忙看看 謝謝 我不會做灌流 所以就是取腦後至於10%福馬林 24h 常溫 蔗糖15% （PBS配置）overnight 4度冰箱 蔗糖30% （PBS配置）overnight 4度冰箱 取出擦乾腦，OCT包埋，放在-20切片機裡冷凍，切片溫度設定-20，厚度10um 另外有些部份的腦組織邊緣也是很容易跟OCT分開 一切就出現一條裂縫 導致貼片偶爾也是會摺到 我包埋前都盡量擦乾了 還是有那個步驟需要更改 或是一定需要灌流呢？ 破洞問題真的很慘啊 data更本無法用 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.171.19.39 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1559872879.A.D13.html
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06/07 19:01, 5年前 , 1F
o/n不代表組織內部已經完全跟糖水是等滲透了，這樣的
06/07 19:01, 1F
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06/07 19:01, 5年前 , 2F
狀況去切當然會有冰晶
06/07 19:01, 2F
我是看腦沉至離心管底才更換的 查文獻也都這樣 請問如何才能確定脫水？
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06/07 19:04, 5年前 , 3F
然後你採取取出組織後固定，後固定時間需要依照你組織
06/07 19:04, 3F
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06/07 19:04, 5年前 , 4F
條件去抓，10趴已經很高了還24hr，如果要做IHC，這樣
06/07 19:04, 4F
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06/07 19:04, 5年前 , 5F
的antigen應該會被這樣的固定條件影響導致染不到東西吧
06/07 19:04, 5F
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06/07 19:05, 5年前 , 6F
建議多找先文獻或者去抱一下current protocol吧
06/07 19:05, 6F
※ 編輯: hachu911 (1.171.19.39 臺灣), 06/07/2019 20:58:37
推
06/07 22:12, 5年前 , 7F
因為原文只寫o/n，如果有下沉，切片時不太會有冰晶的
06/07 22:12, 7F
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06/07 22:12, 5年前 , 8F
問題，你要不要30%後再丟一次30%，我的經驗跟sucrose這
06/07 22:12, 8F
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06/07 22:12, 5年前 , 9F
步驟比較有關
06/07 22:12, 9F
推
06/07 22:17, 5年前 , 10F
oct那段，看你的敘述感覺沒有問題，我的經驗是，如果
06/07 22:17, 10F
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06/07 22:17, 5年前 , 11F
有脫落情形，多半跟組織以及oct溫度不均有關
06/07 22:17, 11F
推
06/07 22:23, 5年前 , 12F
如果可以能附一下結果的圖嗎，或許要看一下那些小洞是
06/07 22:23, 12F
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06/07 22:23, 5年前 , 13F
不是冰晶造成
06/07 22:23, 13F
推
06/12 00:33, 5年前 , 14F
30%泡一個O/N後換新的30%再泡一個O/N看看
06/12 00:33, 14F
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06/12 00:33, 5年前 , 15F
10% formalin還是10% PFA?如果是後者的話太高 前者safe
06/12 00:33, 15F
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06/12 00:34, 5年前 , 16F
因為10% NBF裡面的PFA也是4%
06/12 00:34, 16F
推
06/13 11:13, 5年前 , 17F
有照片看嗎？ 試試提高溫度-10～-15度？
06/13 11:13, 17F
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